डायरेक्ट RT-qPCR किट III
किटचे वर्णन:
◮डायरेक्ट RT-qPCR किट, Foreasy Reverse Transcriptase आणि Foreasy HS Taq DNA Polymerase वापरून, Foregene द्वारे विकसित केले जाणारे, अनन्य प्रतिक्रिया बफरसह, हे किट मजबूत प्रतिकार आणि सुसंगततेसह बनवते, आणि ते थेट प्रतिक्रिया चाचणी करू शकते Foregene Lysis प्रणालीचा टेम्पलेट म्हणून वापर.हे किट COVID-19 न्यूक्लिक अॅसिड डिटेक्शन किट आणि इतर पॅथोजेनिक बॅक्टेरिया न्यूक्लिक अॅसिड डिटेक्शन किट डेव्हलपमेंटसाठी अर्ज करू शकते.
वर्णन
डायरेक्ट आरटी-क्यूपीसीआर किट स्वतंत्रपणे पॅक केलेले आरटी-क्यूपीसीआर बफर (फॉरसी एचएस टाक डीएनए पॉलिमरेझ मिक्स्डसह) आणि उच्च कार्यक्षम प्रदान करतेफोरसी रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस (MMLV),बॅक-एंड किट तयार करणे आणि सिस्टम ऍडजस्टमेंट करणे, सोप्या पडताळणीमध्ये सोयीस्कर बनवणे.
डायरेक्ट RT-qPCR किट, Foreasy Reverse Transcriptase आणि Foreasy HS Taq DNA Polymerase वापरून, Foregene द्वारे विकसित केले जाणारे, अनन्य प्रतिक्रिया बफरसह, हे किट मजबूत प्रतिकार आणि सुसंगततेसह बनवते, आणि ते थेट प्रतिक्रिया चाचणी करू शकते Foregene Lysis प्रणालीचा टेम्पलेट म्हणून वापर.हे किट COVID-19 न्यूक्लिक अॅसिड डिटेक्शन किट आणि इतर पॅथोजेनिक बॅक्टेरिया न्यूक्लिक अॅसिड डिटेक्शन किट डेव्हलपमेंटसाठी अर्ज करू शकते.
सहज आणि जलद वापरून हे किट थेट IVD उत्पादनाचा घटक असू शकते.ते पुन्हा विकसित न करता, फक्त सुलभ पडताळणी आवश्यक आहे.
तपशील
500T, 50,000T
किटचे घटक
| किट सामग्री (20 μL प्रतिक्रिया प्रणाली) | IM-05111-03 | IM-05112-03 |
| ५०० टी | 50,000 टी | |
| फोरसी आरइव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस(२०० यू/μL) | 50 μL×१ | 1 मिली×५ |
| 2× डायरेक्ट qPCRमिक्स-ताकमान | 1 मिली × 5 | 500 मिली×१ |
| सूचना | 1 | 1 |
ऑपरेटिंग पायऱ्या
A: टेम्पलेट आणि अभिकर्मक तयार करा
1. तयार केलेले RNA टेम्पलेट तयार करा (RNA टेम्पलेट काढण्यासाठी आणि शुद्ध करण्यासाठी फोरजीन टोटल RNA आयसोलेशन किट मालिका किट वापरण्याची शिफारस केली जाते) किंवा नमुना क्रॅकिंग उत्पादन (फोरजीन लायसिस सिस्टम वापरण्याची शिफारस केली जाते), विशिष्ट प्राइमर्स (10 μM) आणि इतर संबंधित उपभोग्य वस्तू, उपकरणे.
2. 2× डायरेक्ट RT-qPCR बफर, RNase-फ्री ddH2O आणि 20× ROX संदर्भ डाई (जर गरज असेल तर) बर्फाच्या बॉक्समध्ये ठेवा, ज्यामुळे ते नैसर्गिकरित्या वितळेल, आणि हलक्या हाताने मिसळा.
ब: RT-qPCR प्रणाली तयार करा
प्रतिक्रिया प्रणालीच्या प्रतिक्रिया बफरचा अर्धा खंड मिळवा (उदाहरणार्थ, जर सिस्टमचा आवाज 20 μL असेल, तर त्याला 10 μL 2× डायरेक्ट RT-qPCR बफर मिळणे आवश्यक आहे.). च्या साठीएंजाइमची संबंधित रक्कम, आम्ही असे सुचवितोM-MLV: 10-30 U/20 μL प्रतिक्रिया प्रणाली,ताकडीएनए पॉलिमरेज:1-2 U/20 μL प्रतिक्रिया प्रणालीही आमची सूचना आहे, तुम्ही ती चाचणी करून समायोजित करावी), RNA टेम्पलेट, विशिष्ट प्राइमर्स आणि प्रोब जोडा आणि RNase-Free ddH जोडा2ओ ते 20 μL.RT-qPCR प्रतिक्रिया प्रणालीची विशिष्ट तयारी खालील तक्त्या 1 मध्ये संदर्भित केली जाऊ शकते.
तक्ता 1 : RT-qPCR प्रणाली तयार करा
| घटक | खंड | अंतिम एकाग्रता |
| 2× डायरेक्ट RT-qPCR बफर | 10 μL | 1× |
| फोरसी रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA पॉलिमरेझ | 1-2 यू | |
| फॉरवर्ड प्राइमर (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
| रिव्हर्स प्राइमर (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
| प्रोब (4 μM) | 1 μL | 200nM |
| टेम्पलेट(आरएनए किंवा लिसेट) | X μL | |
| 20× ROX संदर्भ डाई | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
| एकूण खंड | 20 μL |
टीप: फॉरवर्ड प्राइमर आणि रिव्हर्स प्राइमर हे लक्ष्य जनुकाचे विशिष्ट प्राइमर आहेत.qPCR ची प्रणाली व्यावहारिक प्रायोगिक आणि PCR मॉडेल्सनुसार समायोजित केली जाऊ शकते.आम्ही बहुतेक प्राइमर्सच्या अंतिम एकाग्रतेसाठी 400nM ची शिफारस करतो.कृपया तयार केलेल्या एकाग्रतेनुसार आणि शिफारस केलेल्या अंतिम एकाग्रतेनुसार विशिष्ट प्राइमर्स आणि प्रोबची मात्रा समायोजित करा.
1*: वेगवेगळ्या परिमाणात्मक पीसीआर उपकरणांनुसार ROX संदर्भ डाईचे योग्य अंतिम एकाग्रता निवडा.सामान्य परिमाणवाचक पीसीआर साधनांची इष्टतम ROX संदर्भ डाई एकाग्रता खालील तक्त्यामध्ये दर्शविली आहे:
| परिमाणात्मक पीसीआर साधने | ROX संदर्भ डाईची अंतिम एकाग्रता |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/स्टेप वन,इ. | 1× (उदाहरणार्थ, 20 μL प्रतिक्रिया प्रणालीमध्ये 1μl 20×ROX संदर्भ डाई जोडा) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P आणि Mx4000, इ. | 0.5× (उदाहरणार्थ, 20 μL प्रतिक्रिया प्रणालीमध्ये 0.5μl 20×ROX संदर्भ डाई जोडा) |
| रोश पीसीआर इन्स्ट्रुमेंट, बायो-रॅड पीसीआर इन्स्ट्रुमेंट, एपेनडॉर्फ परिमाणात्मक पीसीआर इन्स्ट्रुमेंट इ. | ROX संदर्भ डाईशिवाय |
स्टोरेज आणि शेल्फ लाइफ
किट -20 ± 5℃ वर साठवले पाहिजे.ते ताबडतोब -20 ℃ थर्मोस्टॅटिक रेफ्रिजरेटरमध्ये साठवले पाहिजे.योग्य स्थितीत साठवल्यास वैधता कालावधी 2 वर्षे आहे.
