कोणतेही प्रवर्धन सिग्नल नाहीत

1. किटमधील Taq DNA पॉलिमरेझ अयोग्य स्टोरेजमुळे किंवा किटच्या कालबाह्यतेमुळे त्याची क्रिया गमावते.
शिफारस: किटच्या स्टोरेज अटींची पुष्टी करा;PCR प्रणालीमध्ये योग्य प्रमाणात Taq DNA पॉलिमरेझ पुन्हा जोडा किंवा संबंधित प्रयोगांसाठी नवीन रिअल टाइम पीसीआर किट खरेदी करा.

2. DNA टेम्पलेटमध्ये Taq DNA पॉलिमरेझचे बरेच अवरोधक आहेत.
सूचना: टेम्पलेट पुन्हा शुद्ध करा किंवा वापरलेल्या टेम्पलेटचे प्रमाण कमी करा.

3.Mg2+ एकाग्रता योग्य नाही.
शिफारस: आम्ही प्रदान करत असलेल्या 2× वास्तविक पीसीआर मिक्सची Mg2+ एकाग्रता 3.5mM आहे.तथापि, काही विशेष प्राइमर्स आणि टेम्पलेट्ससाठी, Mg2+ एकाग्रता जास्त असू शकते.म्हणून, Mg2+ एकाग्रता ऑप्टिमाइझ करण्यासाठी तुम्ही थेट MgCl2 जोडू शकता.ऑप्टिमायझेशनसाठी प्रत्येक वेळी Mg2+ 0.5mM वाढवण्याची शिफारस केली जाते.

4. पीसीआर प्रवर्धन परिस्थिती योग्य नाही, आणि प्राइमर अनुक्रम किंवा एकाग्रता अयोग्य आहे.
सूचना: प्राइमरच्या क्रमाच्या शुद्धतेची पुष्टी करा आणि प्राइमर खराब झाला नाही;अॅम्प्लीफिकेशन सिग्नल चांगला नसल्यास, अॅनिलिंग तापमान कमी करण्याचा प्रयत्न करा आणि प्राइमर एकाग्रता योग्यरित्या समायोजित करा.

5. टेम्प्लेटचे प्रमाण खूप कमी किंवा जास्त आहे.
शिफारस: रीअल टाइम पीसीआर प्रयोगासाठी टेम्प्लेट रेखीयकरण ग्रेडियंट डायल्युशन करा आणि सर्वोत्तम पीसीआर प्रभावासह टेम्पलेट एकाग्रता निवडा.

NTC मध्ये खूप जास्त फ्लोरोसेन्स मूल्य आहे

1. ऑपरेशन दरम्यान अभिकर्मक दूषित.
शिफारस: रिअल टाइम पीसीआर प्रयोगांसाठी नवीन अभिकर्मकांसह बदला.

2.पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली तयार करताना दूषितता आली.
शिफारस: ऑपरेशन दरम्यान आवश्यक संरक्षणात्मक उपाय करा, जसे की: लेटेक्स हातमोजे घालणे, फिल्टरसह पिपेट टीप वापरणे इ.

3.प्राइमर्स खराब झाले आहेत, आणि प्राइमर्सच्या निकृष्टतेमुळे विशिष्ट नसलेले प्रवर्धन होईल.
सूचना: प्राइमर्स खराब झाले आहेत की नाही हे शोधण्यासाठी SDS-PAGE इलेक्ट्रोफोरेसीस वापरा आणि रिअल टाइम पीसीआर प्रयोगांसाठी त्यांना नवीन प्राइमर्सने बदला.

प्राइमर डायमर किंवा गैर-विशिष्ट प्रवर्धन

1.Mg2+ एकाग्रता योग्य नाही.
शिफारस: आम्ही प्रदान करत असलेल्या 2× रिअल PCR EasyTM मिक्सची Mg2+ एकाग्रता 3.5 mM आहे.तथापि, काही विशेष प्राइमर्स आणि टेम्पलेट्ससाठी, Mg2+ एकाग्रता जास्त असू शकते.म्हणून, Mg2+ एकाग्रता ऑप्टिमाइझ करण्यासाठी तुम्ही थेट MgCl2 जोडू शकता.ऑप्टिमायझेशनसाठी प्रत्येक वेळी Mg2+ 0.5mM वाढवण्याची शिफारस केली जाते.

2. पीसीआर अॅनिलिंग तापमान खूप कमी आहे.
सूचना: प्रत्येक वेळी PCR अॅनिलिंग तापमान 1℃ किंवा 2℃ ने वाढवा.

3. पीसीआर उत्पादन खूप लांब आहे.
शिफारस: रिअल टाइम पीसीआर उत्पादनाची लांबी 100-150bp दरम्यान असावी, 500bp पेक्षा जास्त नसावी.

4.प्राइमर्स खराब झाले आहेत आणि प्राइमर्सच्या ऱ्हासामुळे विशिष्ट प्रवर्धन दिसू लागेल.
सूचना: प्राइमर्स खराब झाले आहेत की नाही हे शोधण्यासाठी SDS-PAGE इलेक्ट्रोफोरेसीस वापरा आणि रिअल टाइम पीसीआर प्रयोगांसाठी त्यांना नवीन प्राइमर्सने बदला.

5. पीसीआर प्रणाली अयोग्य आहे, किंवा प्रणाली खूपच लहान आहे.
सूचना: PCR प्रतिक्रिया प्रणाली खूप लहान असल्यामुळे शोध अचूकता कमी होईल.रिअल टाइम पीसीआर प्रयोग पुन्हा चालवण्यासाठी परिमाणवाचक पीसीआर उपकरणाने शिफारस केलेली प्रतिक्रिया प्रणाली वापरणे चांगले.

परिमाणवाचक मूल्यांची खराब पुनरावृत्तीक्षमता

1. इन्स्ट्रुमेंट खराब होत आहे.
सूचना: इन्स्ट्रुमेंटच्या प्रत्येक पीसीआर छिद्रामध्ये त्रुटी असू शकतात, परिणामी तापमान व्यवस्थापन किंवा तपासणी दरम्यान खराब पुनरुत्पादनक्षमता असते.कृपया संबंधित इन्स्ट्रुमेंटच्या सूचनांनुसार तपासा.

2.नमुन्याची शुद्धता चांगली नाही.
शिफारस: अशुद्ध नमुन्यांमुळे प्रयोगाची पुनरुत्पादनक्षमता खराब होईल, ज्यामध्ये टेम्पलेट आणि प्राइमर्सची शुद्धता समाविष्ट आहे.टेम्प्लेट पुन्हा शुद्ध करणे सर्वोत्तम आहे आणि प्राइमर्स SDS-PAGE द्वारे सर्वोत्तम शुद्ध केले जातात.

3. पीसीआर प्रणाली तयार करणे आणि स्टोरेज वेळ खूप मोठा आहे.
सूचना: तयारीनंतर लगेचच पीसीआर प्रयोगासाठी रिअल टाइम पीसीआर प्रणाली वापरा आणि जास्त वेळ बाजूला ठेवू नका.

4. पीसीआर प्रवर्धन परिस्थिती योग्य नाही, आणि प्राइमर अनुक्रम किंवा एकाग्रता अयोग्य आहे.
सूचना: प्राइमरच्या क्रमाच्या शुद्धतेची पुष्टी करा आणि प्राइमर खराब झाला नाही;अॅम्प्लीफिकेशन सिग्नल चांगला नसल्यास, अॅनिलिंग तापमान कमी करण्याचा प्रयत्न करा आणि प्राइमर एकाग्रता योग्यरित्या समायोजित करा.

5. पीसीआर प्रणाली अयोग्य आहे, किंवा प्रणाली खूपच लहान आहे.
सूचना: PCR प्रतिक्रिया प्रणाली खूप लहान असल्यामुळे शोध अचूकता कमी होईल.रिअल टाइम पीसीआर प्रयोग पुन्हा चालवण्यासाठी परिमाणवाचक पीसीआर उपकरणाने शिफारस केलेली प्रतिक्रिया प्रणाली वापरणे चांगले.