सेल डायरेक्ट RT qPCR किट—SYBR GREEN I डायरेक्ट सेल लाइसिस सेल रेडी वन-स्टेप qRT-PCR किट
वर्णने
हे किट एक अद्वितीय लिसिस बफर प्रणाली वापरते जी RT-qPCR प्रतिक्रियांसाठी संवर्धित सेल नमुन्यांमधून RNA द्रुतपणे सोडू शकते, ज्यामुळे वेळ घेणारी आणि कष्टदायक RNA शुद्धीकरण प्रक्रिया दूर होते.RNA टेम्पलेट फक्त 7 मिनिटांत मिळू शकते.५×डायरेक्ट आरटी मिक्स आणि २×किटद्वारे प्रदान केलेले डायरेक्ट qPCR मिक्स-SYBR अभिकर्मक रीअल-टाइम परिमाणवाचक पीसीआर परिणाम द्रुत आणि प्रभावीपणे प्राप्त करू शकतात.
5×डायरेक्ट आरटी मिक्स आणि २×डायरेक्ट qPCR मिक्स-SYBR मध्‍ये मजबूत अवरोधक सहिष्णुता आहे, आणि नमुन्यांची लाइसेट थेट RT-qPCR साठी टेम्पलेट म्हणून वापरली जाऊ शकते.या किटमध्ये अद्वितीय आरएनए हाय-अॅफिनिटी फोरजीन रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस आणि हॉट डी-टाक डीएनए पॉलिमरेज, डीएनटीपी, एमजीसीएल समाविष्ट आहे.2, प्रतिक्रिया बफर, पीसीआर ऑप्टिमायझर आणि स्टॅबिलायझर.
तपशील
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
किटचे घटक
| भाग I | बफर CL |
| फोरजीन प्रोटीज प्लस II | |
| बफर एस.टी | |
| भाग दुसरा | डीएनए इरेजर |
| 5× डायरेक्ट आरटी मिक्स | |
| 2× डायरेक्ट qPCR मिक्स-SYBR | |
| 50× ROX संदर्भ डाई | |
| RNase-मुक्त ddH2O | |
| सूचना | |
वैशिष्ट्ये आणि फायदे
■साधे आणि प्रभावी : सेल डायरेक्ट आरटी तंत्रज्ञानासह, आरएनए नमुने फक्त 7 मिनिटांत मिळू शकतात.
■ नमुन्याची मागणी कमी आहे, कमीत कमी 10 पेशींची चाचणी केली जाऊ शकते.
■ उच्च थ्रूपुट: हे 384, 96, 24, 12, 6-वेल प्लेट्समध्ये संवर्धित पेशींमध्ये आरएनए पटकन शोधू शकते.
■ डीएनए इरेजर त्वरीत प्रकाशीत जीनोम काढून टाकू शकतो, त्यानंतरच्या प्रायोगिक परिणामांवर होणारा परिणाम मोठ्या प्रमाणात कमी करू शकतो.
■ ऑप्टिमाइझ केलेली RT आणि qPCR प्रणाली द्वि-चरण RT-PCR रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन अधिक कार्यक्षम आणि PCR अधिक विशिष्ट आणि RT-qPCR प्रतिक्रिया अवरोधकांना अधिक प्रतिरोधक बनवते.
किट अर्ज
अर्जाची व्याप्ती: सुसंस्कृत पेशी.
- नमुना लिसिसद्वारे सोडलेला RNA: फक्त या किटच्या RT-qPCR टेम्पलेटला लागू.
- किटचा वापर खालील उद्देशांसाठी केला जाऊ शकतो: जनुक अभिव्यक्ती विश्लेषण, siRNA-मध्यस्थ जीन सायलेन्सिंग इफेक्टची पडताळणी, औषध तपासणी इ.
आकृती
स्टोरेज आणि शेल्फ लाइफ
या किटचा भाग I 4℃ वर संग्रहित केला पाहिजे;भाग II -20℃ वर संग्रहित केले पाहिजे.
फोरजीन प्रोटीज प्लस II 4 वर साठवले पाहिजे℃, -20℃ वर गोठवू नका.
अभिकर्मक 2×डायरेक्ट qPCR मिक्स-SYBR -20 वर संग्रहित केले पाहिजे℃अंधारात;वारंवार वापरल्यास, ते 4 वर देखील संग्रहित केले जाऊ शकते℃ अल्प-मुदतीच्या स्टोरेजसाठी (10 दिवसांच्या आत वापरा).
रिअल टाइम पीसीआर प्राइमर डिझाइन तत्त्वे
फॉरवर्ड प्राइमर आणि रिव्हर्स प्राइमर
रिअल टाइम पीसीआरसाठी, प्राइमर डिझाइन खूप महत्वाचे आहे.प्राइमर्स पीसीआर प्रवर्धनाच्या विशिष्टतेशी आणि कार्यक्षमतेशी संबंधित आहेत आणि खालील तत्त्वांच्या संदर्भात डिझाइन केले जाऊ शकतात:
प्राइमर लांबी: 18-30bp.
जीसी सामग्री: 40-60%.
टीएम मूल्य: प्राइमर डिझाइन सॉफ्टवेअर, जसे की प्राइमर 5, प्राइमरचे टीएम मूल्य देऊ शकते.अपस्ट्रीम आणि डाउनस्ट्रीम प्राइमर्सची Tm मूल्ये शक्य तितक्या जवळ असावीत.Tm गणना सूत्र देखील वापरले जाऊ शकते: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).PCR करत असताना, 5 °C च्या प्राइमर Tm मूल्यापेक्षा कमी तापमान सामान्यत: अॅनिलिंग तापमान म्हणून निवडले जाते (अॅनलिंग तापमानातील संबंधित वाढ PCR प्रतिक्रियाची विशिष्टता वाढवू शकते).
प्राइमर्स आणि पीसीआर उत्पादने:
डिझाईन प्राइमर पीसीआर प्रवर्धन उत्पादनाची लांबी प्राधान्याने 100-150bp आहे.
टेम्प्लेटच्या दुय्यम संरचनात्मक क्षेत्रामध्ये डिझाइन प्राइमर्स शक्य तितके टाळले पाहिजेत.
अपस्ट्रीम आणि डाउनस्ट्रीम प्राइमर्सच्या 3′ टोकांच्या दरम्यान 2 किंवा अधिक पूरक बेस तयार करणे टाळा.
प्राइमर 3′ टर्मिनल बेस 3 अतिरिक्त सलग G किंवा C सह उपस्थित असू शकत नाही.
प्राइमरमध्ये स्वतःला पूरक संरचना असू शकत नाही, अन्यथा हेअरपिन रचना तयार होईल, ज्यामुळे पीसीआर प्रवर्धन प्रभावित होईल.
ATCG प्राइमर अनुक्रमात शक्य तितक्या समान रीतीने वितरित केले जावे आणि 3′ टर्मिनल बेसला T म्हणून टाळावे.
परिशिष्ट 1: सेल डायरेक्ट RT-qPCR किट घटक पूरक पॅक
1.सेल लिसिस सोल्यूशन
|
| |||
| किटचे घटक (24-वेल लिसिस सिस्टम / विहीर) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 टी | ५०० टी | ||
| भागआय | बफर CL | 20 मि.ली | 100 मि.ली |
| फोरजीन प्रोटीज प्लस II | 400 μl | 1 मिली × 2 | |
| बफर एस.टी | 1 मिली × 2 | 10 मि.ली | |
| भागII | डीएनए इरेजर | 400 μl | 1 मिली × 2 |
2.RT मिक्स
|
| |
| किटचे घटक (20 μl प्रतिक्रिया प्रणाली) | DRT-01011-B1 |
| 200 टी | |
| 5× डायरेक्ट आरटी मिक्स | 800 μl |
| RNase-मुक्त ddH2O | 1.7 मिली × 2 |
|
| ||
| किटचे घटक (20 μl प्रतिक्रिया प्रणाली) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 टी | 1000 टी | |
| 2× डायरेक्ट qPCR मिक्स-SYBR | 1 मिली × 2 | 1.7 मिली × 6 |
| 50× ROX संदर्भ डाई | 40 μl | 200 μl |
| RNase-मुक्त ddH2O | 1.7 मिली | 10 मि.ली |
सूचना पुस्तिका:
