प्राण्यांच्या ऊती आणि पेशींसाठी एकूण आरएनए अलगाव किट एकूण आरएनए निष्कर्षण आणि शुद्धीकरण किट
किटचे वर्णन:
विविध प्राण्यांच्या ऊतींमधून जलद आणि कार्यक्षमतेने उच्च-शुद्धता आणि उच्च-गुणवत्तेचे एकूण आरएनए काढा.
आरएनए ऱ्हासाबद्दल काळजी करण्याची गरज नाही.संपूर्ण प्रणाली RNase-मुक्त आहे
डीएनए-क्लीनिंग कॉलम वापरून डीएनए प्रभावीपणे काढा
DNase न जोडता DNA काढा
सोपे - सर्व ऑपरेशन्स खोलीच्या तपमानावर पूर्ण होतात
जलद - ऑपरेशन 30 मिनिटांत पूर्ण केले जाऊ शकते
सुरक्षित - कोणतेही सेंद्रिय अभिकर्मक वापरलेले नाही
उच्च शुद्धता—OD260/280≈1.8-2.1
किट्सचे वर्णन
50 तयारी, 200 तयारी
हे किट वापरतेस्पिन कॉलम आणि सूत्रआमच्या कंपनीने विकसित केले आहे, जे उच्च कार्यक्षमतेसह विविध प्राण्यांच्या ऊतींमधून उच्च-शुद्धता आणि उच्च-गुणवत्तेचे एकूण RNA काढू शकते. हे एक कार्यक्षम DNA-क्लीनिंग कॉलम प्रदान करते, जे सुपरनॅटंट आणि टिश्यू लाइसेटपासून जीनोमिक डीएनए सहजपणे वेगळे आणि शोषू शकते, सोपे आणि वेळ वाचवते;RNA-केवळ स्तंभ RNA कार्यक्षमतेने बांधू शकतो आणि एकाच वेळी अनेक नमुने अनन्य सूत्रासह प्रक्रिया केली जाऊ शकते.
संपूर्ण प्रणाली RNase-मुक्त आहे, जेणेकरून काढलेला RNA खराब होणार नाही;बफर RW1, Buffer RW2 बफर वॉशिंग सिस्टीम, जेणेकरून प्राप्त RNA प्रथिने, DNA, आयन आणि सेंद्रिय संयुग प्रदूषणापासून मुक्त असेल.
किटचे घटक
| प्राणी एकूण आरएनए अलगाव किट | ||
| किटचे घटक | RE-03011 | RE-03014 |
| ५० टी | 200 टी | |
| बफर RL1* | 25 मिली | 100 मि.ली |
| बफर RL2 | 15 मिली | 60 मिली |
| बफर RW1* | 25 मिली | 100 मि.ली |
| बफर RW2 | 24 मिली | 96 मिली |
| RNase-मुक्त ddH2O | 10 मिली | 40 मिली |
| RNA-केवळ स्तंभ | 50 | 200 |
| डीएनए-स्वच्छता स्तंभ | 50 | 200 |
| माहिती पत्रिका | 1 तुकडा | 1 तुकडा |
उत्पादनाची माहिती
| स्वरूप | स्पिन कॉलम | शुद्धीकरण घटक | फोरजीन स्तंभ, अभिकर्मक |
| फ्लक्स | 1-24 नमुने | तयारीसाठी वेळ | ~३० मिनिटे (२४ नमुने) |
| सेंट्रीफ्यूज | डेस्क सेंट्रीफ्यूज | पायरोलिसिस वेगळे करणे | केंद्रापसारक पृथक्करण |
| नमुना | प्राणी मेदयुक्त;सेल | नमुने रक्कम | ऊतक: 10-20 मिग्रॅ;सेल:(1-5)×106 |
| उत्सर्जन खंड | 50-200 μL | कमाल लोडिंग व्हॉल्यूम | 850 μL |
वैशिष्ट्ये आणि फायदे
■ आरएनए ऱ्हासाबद्दल काळजी करण्याची गरज नाही;संपूर्ण प्रणाली RNase-मुक्त आहे
■ प्रभावीपणे DNA-वापरून DNA-स्वच्छता स्तंभ काढा
■ DNase न जोडता DNA काढा
■ साध्या-सर्व ऑपरेशन्स खोलीच्या तपमानावर पूर्ण केल्या जातात
■ जलद -ऑपरेशन 30 मिनिटांत पूर्ण होऊ शकते
■ सुरक्षित-सेंद्रिय अभिकर्मक आवश्यक नाही
■ उच्च शुद्धता -OD260/280≈1.8-2.1
किट अर्ज
विविध प्रकारच्या ताज्या किंवा गोठलेल्या प्राण्यांच्या ऊती किंवा संवर्धित पेशींमधून एकूण आरएनए काढण्यासाठी आणि शुद्ध करण्यासाठी हे योग्य आहे.
उत्पादन मापदंड
■ डाउनस्ट्रीम अॅप्लिकेशन्स: फर्स्ट-स्ट्रँड सीडीएनए संश्लेषण, आरटी-पीसीआर, आण्विक क्लोनिंग, नॉर्दर्न ब्लॉट इ.
■ नमुने: प्राण्यांच्या ऊती, सुसंस्कृत पेशी
■ डोस: ऊती 10-20mg, पेशी(2-5)×106
■ शुद्धीकरण स्तंभाची कमाल DNA बंधन क्षमता: 80 μg
■ एल्युशन व्हॉल्यूम: 50-200 μl
आकृती
प्राण्यांच्या एकूण आरएनए आयसोलेशन किटवर उपचार 20mg
माऊसचे ताजे नमुने, 5% शुद्ध एकूण RNA 1% आगर घ्या
ग्लायकोजेल इलेक्ट्रोफोरेसीस
1: प्लीहा 2: मूत्रपिंड
3: यकृत 4: हृदय
स्टोरेज आणि शेल्फ लाइफ
किट 24 महिने खोलीच्या तपमानावर (15-25 ℃) किंवा 2-8 ℃ जास्त काळ ठेवता येते.बफर RL1 β-mercaptoethanol (पर्यायी) जोडल्यानंतर 1 महिन्यासाठी 4 ℃ वर साठवले जाऊ शकते.
उद्धृत लेख
१.IF:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.सेंट्रल कंपोझिट डिझाइनच्या ऑप्टिमायझेशनद्वारे यकृत बेस संपादनासाठी mRNA-लोड केलेले लिपिड-सारखे नॅनोकण.अ‍ॅड.कार्य.मेटर.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF:18.187:He X, Hong W, Yang J, et al.उपचारात्मक स्टेम सेलच्या तयारीमध्ये पेशींचे उत्स्फूर्त ऍपोप्टोसिस फॉस्फेटिडाईलसरीन सोडण्याद्वारे इम्युनोमोड्युलेटरी प्रभाव पाडतात.सिग्नल ट्रान्सडक्ट लक्ष्य थेर.2021 जुलै 14;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.IF:17.97: Dai Z, Liu H, Liao J, et al.N7-Methylguanosine tRNA मॉडिफिकेशन ऑन्कोजेनिक mRNA भाषांतर वाढवते आणि इंट्राहेपॅटिक कोलेंजियोकार्सिनोमाच्या प्रगतीस प्रोत्साहन देते.मोल सेल.2021 जुलै 29:S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF:9.225: Cao X, Shu Y, Chen Y, et al.Mettl14-मध्यस्थ m6A मॉडिफिकेशन एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम होमिओस्टॅसिस राखून यकृत पुनर्जन्म सुलभ करते.सेल मोल गॅस्ट्रोएन्टेरॉल हेपेटोल.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
साठी आरएनए अलगाव किट इतर नमुना स्रोतउपलब्ध आहे:
पेशी, वनस्पती, विषाणू, रक्त इ.
आरएनए काढला जात नाही किंवा आरएनए उत्पन्न कमी आहे
पुनर्प्राप्ती कार्यक्षमतेवर परिणाम करणारे अनेक घटक असतात, जसे की: ऊतींचे नमुना आरएनए सामग्री, ऑपरेशनची पद्धत, उत्सर्जन मात्रा इ.
1. ऑपरेशन दरम्यान बर्फ बाथ किंवा क्रायोजेनिक (4 °C) सेंट्रीफ्यूगेशन केले गेले.
शिफारस: संपूर्ण प्रक्रियेदरम्यान खोलीच्या तपमानावर (15-25 डिग्री सेल्सिअस) चालवा, बर्फ आंघोळ करू नका आणि कमी तापमानात सेंट्रीफ्यूज करू नका.
2. अयोग्य नमुना संरक्षण किंवा जास्त नमुना साठवण वेळ.
शिफारस: नमुने -80 डिग्री सेल्सिअस तापमानात साठवा किंवा द्रव नायट्रोजनमध्ये गोठवा आणि वारंवार फ्रीझ-थॉ वापर टाळा;RNA काढण्यासाठी ताजे ऊतक किंवा सुसंस्कृत पेशी वापरण्याचा प्रयत्न करा.
3. अपुरा नमुना लिसिस.
शिफारस: ऊतींचे एकसंधीकरण करताना, ऊती पुरेशा प्रमाणात एकरूप झाल्याची खात्री करा आणि आरएनए सोडण्याचे स्पष्टीकरण देण्यासाठी ऊतक पेशी पुरेशा प्रमाणात विभाजित झाल्या आहेत याची खात्री करा.
4. एल्युएंट योग्यरित्या जोडलेले नाही.
शिफारस: RNase-मुक्त ddH असल्याची पुष्टी करा2शुध्दीकरण स्तंभाच्या पडद्याच्या मध्यभागी ओ हे ड्रॉपवाईज जोडले जाते.
5. परिपूर्ण इथेनॉलची योग्य मात्रा बफर RL2 किंवा बफर RW2 मध्ये जोडली गेली नाही.
शिफारस: सूचनांचे पालन करा, बफर RL2 आणि Buffer RW2 मध्ये परिपूर्ण इथेनॉलचे योग्य प्रमाण जोडा आणि किट वापरण्यापूर्वी चांगले मिसळा.
6. ऊतक नमुना डोस योग्य नाही.
शिफारस: 10-20 मिलीग्राम ऊती किंवा (1-5) × 10 वापरा6पेशी प्रति 500 μl बफर RL1, कारण जास्त ऊती वापरामुळे आरएनए निष्कर्षण कमी होऊ शकते.
7. अयोग्य उत्सर्जन खंड किंवा अपूर्ण उत्सर्जन.
शिफारस: शुध्दीकरण स्तंभाची उत्सर्जन मात्रा 50-200 μl आहे;जर उत्सर्जनाचा परिणाम समाधानकारक नसेल, तर प्रीहीटेड RNase-फ्री ddH जोडल्यानंतर खोलीच्या तापमानात ठेवण्याची वेळ वाढवण्याची शिफारस केली जाते.2ओ, उदा. 5-10 मिनिटांसाठी.
8. बफर RW2 वॉश नंतर शुद्धीकरण स्तंभात इथेनॉल अवशेष असतात.
शिफारस: बफर RW2 वॉशिंगनंतर इथेनॉलचे अवशेष असल्यास, रिक्त ट्यूब सेंट्रीफ्यूगेशन 1 मिनिटांसाठी, रिक्त ट्यूब सेंट्रीफ्यूगेशन ऑपरेशनची वेळ 2 मिनिटांपर्यंत वाढविली जाऊ शकते, किंवा शुद्धीकरण स्तंभ खोलीच्या तापमानावर 5 मिनिटांसाठी ठेवला जाऊ शकतो जेणेकरून ते पुरेशा प्रमाणात काढून टाकावे.
शुद्ध केलेले आरएनए खराब झाले आहे
शुद्ध केलेल्या RNA ची गुणवत्ता नमुन्याचे संरक्षण, RNase दूषित होणे आणि हाताळणी इत्यादी घटकांशी संबंधित आहे.
1. ऊतींचे नमुने वेळेत ठेवले जात नाहीत.
शिफारस: ऊतींचे नमुने किंवा पेशी गोळा केल्यानंतर वेळेवर न वापरल्यास, ताबडतोब -80 डिग्री सेल्सिअस किंवा द्रव नायट्रोजनवर क्रायोप्रीझर्व्ह करा.आरएनए काढण्यासाठी, जेव्हा शक्य असेल तेव्हा नवीन घेतलेल्या ऊती किंवा पेशींचा नमुना वापरा.
2. ऊतींचे नमुने वारंवार फ्रीझ-वितळणे.
शिफारस: ऊतींचे नमुने साठवताना, जतन करण्यासाठी त्यांचे लहान तुकडे करणे आणि नमुना वारंवार गोठणे-विरघळणे आणि RNA ची झीज टाळण्यासाठी त्यांचा वापर करताना त्यातील एक तुकडा काढून टाकणे चांगले.
3. ऑपरेशन दरम्यान RNase ची ओळख करून दिली जाते किंवा डिस्पोजेबल हातमोजे, मुखवटे इ.
शिफारस: आरएनए काढण्याचे प्रयोग वेगळ्या आरएनए मॅनिप्युलेशन रूममध्ये उत्तम प्रकारे केले जातात आणि प्रयोगापूर्वी टेबल साफ केले जाते.
प्रयोगादरम्यान डिस्पोजेबल हातमोजे आणि मुखवटे वापरा जेणेकरून RNase च्या प्रवेशामुळे होणारे RNA ऱ्हास कमी होईल.
4. वापरादरम्यान अभिकर्मक RNase सह दूषित होतात.
शिफारस: संबंधित प्रयोगांसाठी नवीन अॅनिमल टोटल आरएनए आयसोलेशन किटने बदला.
5. आरएनए मॅनिपुलेशनमध्ये वापरल्या जाणार्‍या सेंट्रीफ्यूज ट्यूब, टिपा इत्यादी RNase द्वारे दूषित आहेत.
शिफारस: आरएनए काढण्यासाठी वापरल्या जाणार्‍या सेंट्रीफ्यूज नळ्या, टिपा, विंदुक इ. सर्व RNase-मुक्त असल्याची पुष्टी करा.
शुद्ध प्राप्त केलेले आरएनए डाउनस्ट्रीम प्रयोगांवर परिणाम करते
शुद्धीकरण स्तंभाद्वारे शुद्ध केलेले आरएनए, मीठ आयन, प्रथिने सामग्री खूप मोठी असल्यास डाउनस्ट्रीम प्रयोगावर परिणाम करेल, जसे की: रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन, नॉर्दर्न ब्लॉट इ.
1. उत्सर्जित RNA मध्ये मीठ आयन अवशेष असतात.
शिफारस: बफर RW2 मध्ये इथेनॉलचे योग्य प्रमाण जोडले गेल्याची पुष्टी करा आणि ऑपरेशनसाठी दर्शविलेल्या केंद्रापसारक वेगाने 2 शुद्धीकरण कॉलम वॉश करा;मीठ आयन अवशेष असल्यास, शुद्धीकरण स्तंभ बफर RW2 मध्ये खोलीच्या तपमानावर 5 मिनिटांसाठी सोडा आणि मीठ दूषित होण्यासाठी जास्तीत जास्त काढून टाकण्यासाठी सेंट्रीफ्यूगेशन करा.
2. उत्सर्जित RNA मध्ये इथेनॉल अवशेष.
शिफारस: पुष्टी करा की बफर RW2 वॉशिंगनंतर, ऑपरेशनसाठी दर्शविलेल्या सेंट्रीफ्यूगेशन वेगाने रिक्त ट्यूब सेंट्रीफ्यूगेशन ऑपरेशन करा, जर इथेनॉलचे अवशेष असतील तर रिक्त ट्यूब सेंट्रीफ्यूगेशन ऑपरेशनची वेळ 2 मिनिटांपर्यंत वाढवा, किंवा 5 मिनिटांसाठी खोलीच्या तापमानावर सोडा. आयड्यू
