समस्या विश्लेषण मार्गदर्शक

तुम्हाला येऊ शकतील अशा समस्यांचे खालील विश्लेषणवनस्पती एकूणRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

स्पिन कॉलम बंद आहे

स्पिन कॉलमच्या अडथळ्यामुळे RNA उत्पन्न कमी होईल किंवा RNA मिळवण्यासाठी शुद्ध होऊ शकत नाही आणि प्राप्त RNA ची गुणवत्ता कमी होईल.

सामान्य कारण विश्लेषण:

1. नमुना पूर्णपणे तुटलेला नाही.

अपूर्ण नमुना विखंडन डीएनए-क्लीनिंग कॉलम ब्लॉक करू शकते, जे RNA उत्पन्न आणि गुणवत्तेवर देखील परिणाम करू शकते.आम्ही शिफारस करतो की नमुना विखंडन करत असताना, शक्य तितक्या पेशींच्या भिंती आणि पेशींच्या पडद्यासारख्या ऊतींना तोडण्यासाठी द्रव नायट्रोजन पुरेशा प्रमाणात त्वरीत पीसून घ्या.पॉलिफेनॉल पॉलिसेकेराइड्सच्या वनस्पती नमुन्यांसाठी, आम्ही शिफारस करतो की तुम्ही प्लांट टोटल आरएनए आयसोलेशन किट प्लस वापरा.

2. डीएनए-क्लीनिंग कॉलम आयसोलेटेड सुपरनॅटंट, संभाव्य सेल डेब्रिज पेलेटची एस्पिरेट करा.

एस्पिरेटेड सेल डेब्रिस पेलेट आरएनए शोषण प्रक्रियेदरम्यान केवळ RNA-स्तंभ बंद करू शकते (प्रक्रियेचा चरण 5, पॉलिसेकेराइड पॉलीफेनॉल प्रक्रियेचा चरण 6 पहा).आम्‍ही शिफारस करतो की सेल डेब्रिज एस्पिरेट होण्‍यासाठी हे सुपरनॅटंट वापरताना काळजी घेणे आवश्‍यक आहे.

3. नमुन्याची प्रारंभिक रक्कम खूप मोठी आहे.

अत्याधिक नमुन्याचा वापर केल्याने अपूर्ण नमुना विखंडन किंवा बफर PRL1 किंवा बफर PSL1 द्वारे पेशींचे अपूर्ण लिसिस होईल, परिणामी शुध्दीकरण ऑपरेशनसाठी शुद्धीकरण स्तंभ बंद होईल.प्लांट टोटल आरएनए आयसोलेशन किटमध्ये एका ऑपरेट केलेल्या नमुन्याच्या प्रति एकल शुद्धीकरणाची प्रारंभिक कमाल 50 मिलीग्राम असते.पॉलिफेनॉल पॉलिसेकेराइड्सच्या वनस्पती नमुन्यांसाठी, आम्ही शिफारस करतो की तुम्ही प्लांट टोटल आरएनए आयसोलेशन किट प्लस वापरून पहा.

4. सेंट्रीफ्यूजचे तापमान खूप कमी आहे.

संपूर्ण आरएनए अलगाव आणि शुद्धीकरण नमुन्याच्या ऊतींचे द्रव नायट्रोजन व्यत्यय वगळता, सर्व चरण खोलीच्या तपमानावर (20-25 °C) केले जातात.काही कमी-तापमान सेंट्रीफ्यूजचे तापमान 20 °C पेक्षा कमी असते, ज्यामुळे DNA-क्लीनिंग कॉलम आणि/किंवा RNA-केवळ कॉलममध्ये अडथळे निर्माण होऊ शकतात.असे झाल्यास, सेंट्रीफ्यूज तापमान 20-25 °C वर सेट करा आणि लिसिस मिश्रण आणि/किंवा इथेनॉल पृथक्करण सुपरनॅटंट 37 °C पर्यंत पूर्व-उबदार करा.

कोणताही आरएनए काढला नाही किंवा आरएनए उत्पन्न कमी नाही

पुनर्प्राप्ती कार्यक्षमतेवर परिणाम करणारे सहसा अनेक घटक असतात, जसे की: नमुना आरएनए सामग्री, ऑपरेशन पद्धत, उत्सर्जन मात्रा इ.

खालीलप्रमाणे सामान्य कारणांचे विश्लेषण:

1. ऑपरेशन दरम्यान बर्फाचे स्नान किंवा कमी तापमान (4°C) सेंट्रीफ्यूगेशन केले गेले.

सूचना: संपूर्ण प्रक्रियेत खोलीच्या तपमानावर (15-25 डिग्री सेल्सिअस) चालवा, बर्फ आंघोळ आणि कमी तापमानात सेंट्रीफ्यूगेशन करू नका.

       2.नमुन्याचे अयोग्य जतन किंवा नमुन्याचे दीर्घकाळ जतन केल्यामुळे आरएनए खराब झाले आहे.

शिफारस: ताजे गोळा केलेले नमुने द्रव नायट्रोजनमध्ये त्वरीत गोठवले जावे आणि नंतर -80 डिग्री सेल्सिअस तापमानात दीर्घकाळ साठवले जावे, नमुने वारंवार गोठणे आणि वितळणे टाळा;किंवा RNA स्टॅबिलायझर RNAlater द्रावणात (प्राण्यांचे नमुने) नमुने ताबडतोब भिजवा.

       3.अपुरा नमुना विखंडन आणि लिसिसमुळे शुद्धीकरण स्तंभात अडथळा निर्माण होतो.

सूचना: टिश्यू पीसताना, कृपया टिश्यू पुरेशा प्रमाणात ग्राउंड असल्याची खात्री करा आणि त्वरीत पूर्व-तयार बफर PSL1 मध्ये हस्तांतरित करा (बीटा-एमईचे योग्य प्रमाण जोडले गेले असल्याची पुष्टी करा, प्रक्रियेची पायरी 1 पहा).

4.Eluent चुकीच्या पद्धतीने जोडले गेले.

सूचना: RNase-मुक्त ddH असल्याची खात्री करा₂O शुद्धीकरण स्तंभाच्या पडद्याच्या मध्यभागी ड्रिप केले जाते.

5. परिपूर्ण इथेनॉलचे योग्य प्रमाण बफर PSL2 किंवा बफर PRW2 मध्ये जोडले गेले नाही.

सूचना: कृपया सूचनांचे अनुसरण करा, Buffer PSL2 आणि Buffer PRW2 मध्ये परिपूर्ण इथेनॉलचे योग्य प्रमाण जोडा आणि किट वापरण्यापूर्वी चांगले मिसळा.

6.उती नमुन्याचे प्रमाण अयोग्य आहे.

सूचना: Buffer PSL1 च्या 500 μl प्रति 50 mg टिश्यू वापरा.जास्त ऊती वापरल्याने काढलेल्या आरएनएचे प्रमाण कमी होईल आणि परिणामी आरएनएची शुद्धता देखील कमी होईल.आम्ही जोरदार शिफारस करतो की प्रारंभिक नमुना डोस प्रति RNA निष्कर्षण ऑपरेशन 50 mg पेक्षा जास्त नसावा.

7. अयोग्य इल्युशन व्हॉल्यूम किंवा अपूर्ण इल्युशन.

सूचना: शुध्दीकरण स्तंभाची एल्युएंट व्हॉल्यूम 50-200 μl आहे;इल्युशन प्रभाव समाधानकारक नसल्यास, प्रीहीटेड RNase-फ्री ddH जोडल्यानंतर खोलीच्या तपमानावर वेळ वाढवण्याची शिफारस केली जाते.₂ओ, जसे की 5-10 मि.

8. बफर PRW2 सह धुतल्यानंतर शुद्धीकरण स्तंभात इथेनॉल अवशेष असतात.

   सूचना: जर रिकामी नळी 1 मिनिटांसाठी सेंट्रीफ्यूज केली असेल आणि बफर PRW2 मध्ये धुतल्यानंतरही इथेनॉल शिल्लक असेल, तर तुम्ही रिकाम्या नळीच्या सेंट्रीफ्यूगेशनची वेळ 2 मिनिटांपर्यंत वाढवू शकता किंवा अवशिष्ट इथानॉल पूर्णपणे काढून टाकण्यासाठी शुध्दीकरण स्तंभ 5 मिनिटांसाठी खोलीच्या तपमानावर ठेवू शकता.

9. किटचा वापर चुकीच्या पद्धतीने झाला.

   सूचना: पॉलीफेनॉलिक पॉलिसेकेराइड्सच्या वनस्पतींच्या नमुन्यांसाठी, प्लांट टोटल आरएनए आयसोलेशन किट सारख्या सामान्य किटचा वापर करून आदर्श आरएनए नमुने मिळू शकत नाहीत.आम्ही तुम्हाला Plant Total RNA IsolationKit Plus वापरण्याची शिफारस करतो, जे विशेषत: पॉलिफेनोलिक पॉलिसेकेराइड वनस्पतींच्या नमुन्यांसाठी डिझाइन केलेले आहे.पॉलीफेनॉल आणि पॉलिसेकेराइड वनस्पतींच्या नमुन्यांमधून आरएनए काढण्यासाठी खास विकसित केलेली किट.

OD260/OD280 मूल्य कमी आहे

ddH सह RNA उत्सर्जन₂O आणि स्पेक्ट्रोफोटोमीटर रीडिंगसाठी वापरल्याचा परिणाम कमी OD260/OD280 मूल्यांमध्ये होतो.आम्ही RNase-मुक्त ddH ऐवजी 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 वापरण्याची शिफारस करतो₂ओ टू एल्युट आरएनए) तुलनेने योग्य OD260/OD280 मूल्ये प्राप्त करण्यासाठी, पृष्ठ 19 वर “RNA एकाग्रता आणि शुद्धीकरण परीक्षण” पहा.

शुद्ध केलेले आरएनए खराब झाले आहे

शुद्ध RNA ची गुणवत्ता नमुना संरक्षण, RNase दूषित होणे आणि हाताळणी यांसारख्या घटकांशी संबंधित आहे.

सामान्य कारणांचे विश्लेषण:

1. ऊतींचे नमुने संकलनानंतर वेळेत साठवले गेले नाहीत.

    शिफारस: ऊतींचे नमुने गोळा केल्यानंतर वेळेत वापरले जात नसल्यास, कृपया ते कमी तापमानात द्रव नायट्रोजनमध्ये ताबडतोब साठवा किंवा द्रव नायट्रोजनमध्ये द्रुत गोठल्यानंतर दीर्घकालीन साठवणुकीसाठी ते -80°C वर हस्तांतरित करा, किंवा RNA स्टॅबिलायझर RNAlater द्रावणात (प्राण्यांचे नमुने) ताबडतोब बुडवा.RNA काढण्यासाठी, ताजे गोळा केलेले ऊतींचे नमुने वापरण्याचा प्रयत्न करा.

2.उतींचे नमुने वारंवार गोठवणे आणि वितळणे.

   सूचना: ऊतींचे नमुने साठवताना, संवर्धनासाठी त्यांचे लहान तुकडे करणे आणि नमुने वारंवार गोठवल्यामुळे आणि वितळल्यामुळे होणारे RNA ची झीज टाळण्यासाठी त्यांचा वापर करताना त्यातील काही भाग काढून टाकणे चांगले.

3.RNase ऑपरेशन रूममध्ये सादर केले जाते किंवा डिस्पोजेबल हातमोजे, मास्क इ.

   सूचना: RNA काढण्याचे प्रयोग वेगळे RNA ऑपरेशन्समध्ये उत्तम प्रकारे केले जातात आणि प्रयोगापूर्वी प्रयोगशाळेतील टेबल स्वच्छ केले जावे, आणि RNase च्या प्रवेशामुळे RNA ची मोठ्या प्रमाणात होणारी झीज टाळण्यासाठी प्रयोगादरम्यान डिस्पोजेबल हातमोजे आणि मुखवटे घालावेत.

4. वापरादरम्यान RNase द्वारे अभिकर्मक दूषित होतो.

   सूचना: संबंधित प्रयोगांसाठी वनस्पती एकूण आरएनए एक्सट्रॅक्शन किटच्या नवीन मालिकेने बदला.

5. आरएनए मॅनिपुलेशनसाठी वापरल्या जाणार्‍या सेंट्रीफ्यूज ट्यूब आणि विंदुक टिपा RNase द्वारे दूषित आहेत.

सूचना: आरएनए काढण्यासाठी वापरल्या जाणार्‍या सेंट्रीफ्यूज ट्यूब, पिपेट टिप्स, विंदुक इ. सर्व RNase-मुक्त असल्याची खात्री करा.

सूचना पुस्तिका:

प्लांट टोटल आरएनए आयसोलेशन किट इंस्ट्रक्शन मॅन्युअल