सेल टोटल आरएनए आयसोलेशन किट सेलमधून एकूण आरएनए आयसोलेशन प्युरिफिकेशन किट्स
किटचे वर्णन:
उच्च शुद्ध आणि उच्च दर्जाचे एकूण आरएनए विविध संवर्धित पेशींमधून 11 मिनिटांत मिळू शकते.
RNase-मुक्त
खोलीच्या तपमानावर चालते (15-25℃)
डीएनए-स्वच्छता स्तंभासह
उच्च आरएनए उत्पन्न
जलद: 11 मिनिटांत निष्कर्षण पूर्ण करा
सुरक्षितता: कोणतेही सेंद्रिय रसायन नाही
वर्णन
हे किट फोरजीनने विकसित केलेले स्पिन कॉलम आणि सूत्र वापरते, जे 96, 24, 12 आणि 6-वेल प्लेट्समध्ये संवर्धित पेशींमधून उच्च-शुद्धता आणि उच्च-गुणवत्तेचे एकूण RNA कार्यक्षमतेने काढू शकते.
किट एक कार्यक्षम DNA-क्लीनिंग कॉलम प्रदान करते, जे सहजपणे सुपरनॅटंट आणि सेल लाइसेट वेगळे करू शकते, जीनोमिक DNA बांधू शकते आणि काढून टाकू शकते.ऑपरेशन सोपे आणि वेळेची बचत आहे.
Tहे RNA-केवळ स्तंभ RNA ला एका अद्वितीय सूत्राने कार्यक्षमतेने बांधू शकतात.एकाच वेळी मोठ्या संख्येने नमुन्यांची प्रक्रिया केली जाऊ शकते.
किटचे घटक
| किट रचना | RE-03111 | RE-03114 |
| ५० टी | 200 टी | |
| बफर cRL1* | 25 मिली | 100 मिली |
| बफर cRL2 | 15 मिली | 60 मिली |
| बफर RW1* | 25 मिली | 100 मिली |
| बफर RW2 | 24 मिली | 96 मिली |
| RNase-मुक्त ddH2O | 10 मिली | 40 मिली |
| RNA-केवळ स्तंभ | 50 | 200 |
| डीएनए-स्वच्छता स्तंभ | 50 | 200 |
| सूचना | 1 | 1 |
*कृपया ऑपरेशन दरम्यान हातमोजे घाला आणि संरक्षणात्मक उपाय करा कारण बफर cRL1 आणि Buffer RW1 मध्ये त्रासदायक कॅओट्रॉपिक लवण असतात.
वैशिष्ट्ये आणि फायदे
■ संपूर्ण प्रक्रिया खोलीच्या तपमानावर (15-25℃), बर्फाचे आंघोळ आणि कमी तापमान केंद्रीकरणाशिवाय चालते.
■ संपूर्ण किट RNase-मुक्त आहे, RNA निकृष्टतेबद्दल काळजी करण्याची गरज नाही.
■ DNA-क्लीनिंग कॉलम विशेषतः DNA बांधतो, जेणेकरून किट अतिरिक्त DNase न जोडता जीनोमिक DNA दूषितता काढून टाकू शकते.
■ उच्च RNA उत्पन्न: RNA-केवळ स्तंभ आणि अद्वितीय सूत्र RNA कार्यक्षमतेने शुद्ध करू शकतात.
■ वेगवान गती: ऑपरेट करणे सोपे आणि 11 मिनिटांत पूर्ण केले जाऊ शकते.
■ सुरक्षितता: कोणत्याही सेंद्रिय अभिकर्मकाची आवश्यकता नाही.
■ उच्च दर्जाचे: शुद्ध केलेले आरएनए उच्च शुद्धतेचे आहे, प्रथिने आणि इतर अशुद्धतेपासून मुक्त आहे आणि त्यानंतरच्या विविध प्रयोगांना पूर्ण करू शकते.
किट अर्ज
हे 96, 24, 12 आणि 6-वेल प्लेट्समधील संवर्धित पेशींमधून एकूण RNA काढण्यासाठी आणि शुद्ध करण्यासाठी योग्य आहे.
कामाचा प्रवाह
आकृती
सेल टोटल आरएनए आयसोलेशन किटच्या अॅग्रोज जेल बॅटरी डायग्रामने वरील वेगवेगळ्या पेशींची संख्या, 20μl व्हॉल्यूम इलुशन, 2μl शुद्ध एकूण RNA 1% घ्या.
स्टोरेज आणि शेल्फ लाइफ
किट 12 महिने खोलीच्या तपमानावर (15-25 ℃) किंवा 2-8 ℃ जास्त काळ (24 महिने) ठेवता येते.
बफर cRL1 2-hydroxy-1-ethanethiol (पर्यायी) जोडल्यानंतर 1 महिन्यासाठी 4 ℃ वर साठवले जाऊ शकते.
आरएनए काढला जात नाही किंवा आरएनए उत्पन्न कमी आहे
पुनर्प्राप्ती कार्यक्षमतेवर परिणाम करणारे अनेक घटक असतात, जसे की: ऊतींचे नमुना आरएनए सामग्री, ऑपरेशनची पद्धत, उत्सर्जन मात्रा इ.
1. ऑपरेशन दरम्यान बर्फ बाथ किंवा क्रायोजेनिक (4 °C) सेंट्रीफ्यूगेशन केले गेले.
शिफारस: संपूर्ण प्रक्रियेदरम्यान खोलीच्या तपमानावर (15-25 डिग्री सेल्सिअस) चालवा, बर्फ आंघोळ करू नका आणि कमी तापमानात सेंट्रीफ्यूज करू नका.
2. अयोग्य नमुना संरक्षण किंवा जास्त नमुना साठवण वेळ.
शिफारस: नमुने -80 डिग्री सेल्सिअस तापमानात साठवा किंवा द्रव नायट्रोजनमध्ये गोठवा आणि वारंवार फ्रीझ-थॉ वापर टाळा;RNA काढण्यासाठी ताजे ऊतक किंवा सुसंस्कृत पेशी वापरण्याचा प्रयत्न करा.
3. अपुरा नमुना लिसिस.
शिफारस: ऊतींचे एकसंधीकरण करताना, ऊती पुरेशा प्रमाणात एकरूप झाल्याची खात्री करा आणि आरएनए सोडण्याचे स्पष्टीकरण देण्यासाठी ऊतक पेशी पुरेशा प्रमाणात विभाजित झाल्या आहेत याची खात्री करा.
4. एल्युएंट योग्यरित्या जोडलेले नाही.
शिफारस: RNase-मुक्त ddH असल्याची पुष्टी करा2शुध्दीकरण स्तंभाच्या पडद्याच्या मध्यभागी ओ हे ड्रॉपवाईज जोडले जाते.
5. परिपूर्ण इथेनॉलची योग्य मात्रा बफर RL2 किंवा बफर RW2 मध्ये जोडली गेली नाही.
शिफारस: सूचनांचे पालन करा, बफर RL2 आणि Buffer RW2 मध्ये परिपूर्ण इथेनॉलचे योग्य प्रमाण जोडा आणि किट वापरण्यापूर्वी चांगले मिसळा.
6. ऊतक नमुना डोस योग्य नाही.
शिफारस: 10-20 मिलीग्राम ऊती किंवा (1-5) × 10 वापरा6पेशी प्रति 500 μl बफर RL1, कारण जास्त ऊती वापरामुळे आरएनए निष्कर्षण कमी होऊ शकते.
7. अयोग्य उत्सर्जन खंड किंवा अपूर्ण उत्सर्जन.
शिफारस: शुध्दीकरण स्तंभाची उत्सर्जन मात्रा 50-200 μl आहे;जर उत्सर्जनाचा परिणाम समाधानकारक नसेल, तर प्रीहीटेड RNase-फ्री ddH जोडल्यानंतर खोलीच्या तापमानात ठेवण्याची वेळ वाढवण्याची शिफारस केली जाते.2ओ, उदा. 5-10 मिनिटांसाठी.
8. बफर RW2 वॉश नंतर शुद्धीकरण स्तंभात इथेनॉल अवशेष असतात.
शिफारस: बफर RW2 वॉशिंगनंतर इथेनॉलचे अवशेष असल्यास, रिक्त ट्यूब सेंट्रीफ्यूगेशन 1 मिनिटांसाठी, रिक्त ट्यूब सेंट्रीफ्यूगेशन ऑपरेशनची वेळ 2 मिनिटांपर्यंत वाढविली जाऊ शकते, किंवा शुद्धीकरण स्तंभ खोलीच्या तापमानावर 5 मिनिटांसाठी ठेवला जाऊ शकतो जेणेकरून ते पुरेशा प्रमाणात काढून टाकावे.
शुद्ध केलेले आरएनए खराब झाले आहे
शुद्ध केलेल्या RNA ची गुणवत्ता नमुन्याचे संरक्षण, RNase दूषित होणे आणि हाताळणी इत्यादी घटकांशी संबंधित आहे.
1. ऊतींचे नमुने वेळेत ठेवले जात नाहीत.
शिफारस: ऊतींचे नमुने किंवा पेशी गोळा केल्यानंतर वेळेवर न वापरल्यास, ताबडतोब -80 डिग्री सेल्सिअस किंवा द्रव नायट्रोजनवर क्रायोप्रीझर्व्ह करा.आरएनए काढण्यासाठी, जेव्हा शक्य असेल तेव्हा नवीन घेतलेल्या ऊती किंवा पेशींचा नमुना वापरा.
2. ऊतींचे नमुने वारंवार फ्रीझ-वितळणे.
शिफारस: ऊतींचे नमुने साठवताना, जतन करण्यासाठी त्यांचे लहान तुकडे करणे आणि नमुना वारंवार गोठणे-विरघळणे आणि RNA ची झीज टाळण्यासाठी त्यांचा वापर करताना त्यातील एक तुकडा काढून टाकणे चांगले.
3. ऑपरेशन दरम्यान RNase ची ओळख करून दिली जाते किंवा डिस्पोजेबल हातमोजे, मुखवटे इ.
शिफारस: आरएनए काढण्याचे प्रयोग वेगळ्या आरएनए मॅनिप्युलेशन रूममध्ये उत्तम प्रकारे केले जातात आणि प्रयोगापूर्वी टेबल साफ केले जाते.
प्रयोगादरम्यान डिस्पोजेबल हातमोजे आणि मुखवटे वापरा जेणेकरून RNase च्या प्रवेशामुळे होणारे RNA ऱ्हास कमी होईल.
4. वापरादरम्यान अभिकर्मक RNase सह दूषित होतात.
शिफारस: संबंधित प्रयोगांसाठी नवीन अॅनिमल टोटल आरएनए आयसोलेशन किटने बदला.
5. आरएनए मॅनिपुलेशनमध्ये वापरल्या जाणार्‍या सेंट्रीफ्यूज ट्यूब, टिपा इत्यादी RNase द्वारे दूषित आहेत.
शिफारस: आरएनए काढण्यासाठी वापरल्या जाणार्‍या सेंट्रीफ्यूज नळ्या, टिपा, विंदुक इ. सर्व RNase-मुक्त असल्याची पुष्टी करा.
शुद्ध प्राप्त केलेले आरएनए डाउनस्ट्रीम प्रयोगांवर परिणाम करते
शुद्धीकरण स्तंभाद्वारे शुद्ध केलेले आरएनए, मीठ आयन, प्रथिने सामग्री खूप मोठी असल्यास डाउनस्ट्रीम प्रयोगावर परिणाम करेल, जसे की: रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन, नॉर्दर्न ब्लॉट इ.
1. उत्सर्जित RNA मध्ये मीठ आयन अवशेष असतात.
शिफारस: बफर RW2 मध्ये इथेनॉलचे योग्य प्रमाण जोडले गेल्याची पुष्टी करा आणि ऑपरेशनसाठी दर्शविलेल्या केंद्रापसारक वेगाने 2 शुद्धीकरण कॉलम वॉश करा;मीठ आयन अवशेष असल्यास, शुद्धीकरण स्तंभ बफर RW2 मध्ये खोलीच्या तपमानावर 5 मिनिटांसाठी सोडा आणि मीठ दूषित होण्यासाठी जास्तीत जास्त काढून टाकण्यासाठी सेंट्रीफ्यूगेशन करा.
2. उत्सर्जित RNA मध्ये इथेनॉल अवशेष.
शिफारस: पुष्टी करा की बफर RW2 वॉशिंगनंतर, ऑपरेशनसाठी दर्शविलेल्या सेंट्रीफ्यूगेशन वेगाने रिक्त ट्यूब सेंट्रीफ्यूगेशन ऑपरेशन करा, इथेनॉलचे अवशेष असल्यास रिक्त ट्यूब सेंट्रीफ्यूगेशन ऑपरेशनची वेळ 2 मिनिटांपर्यंत वाढवा किंवा खोलीच्या तपमानावर 5 मीटर सोडा.
