स्तंभ प्लग केला

स्तंभ प्लग केल्यानंतर, RNA उत्पन्न कमी होते किंवा RNA शुद्ध करणे अशक्य होते आणि प्राप्त RNA वस्तुमान कमी होते.

सामान्य कारणांचे विश्लेषण:

1. सॅम्पल ब्रेक कसून नसतात.

नमुना तुटल्याने डीएनए-क्लीनिंग कॉलम पूर्णपणे ब्लॉक होत नाही, तर आरएनए उत्पन्न आणि गुणवत्तेवर परिणाम होतो.जेव्हा तुम्ही नमुने तोडता तेव्हा आम्ही पुरेशा द्रव नायट्रोजनमध्ये जलद ग्राइंडिंग ऑपरेशनची शिफारस करतो, सॅम्पल सेलची भिंत, सेल झिल्ली आणि इतर ऊतक क्रश करण्याचा प्रयत्न करा.पॉलिओल पॉलिसेकेराइड्सच्या वनस्पती नमुन्यांसाठी, आम्ही शिफारस करतो की तुम्ही प्लांट टोटल आरएनए आयसोलेशन किट प्लस वापरा.

2. डीएनए-क्लीनिंग कॉलमसह विभक्त नमुना सुपरनेटंट सक्शन करताना, संभाव्य सेल खंडित अवक्षेपण इनहेल केले जाऊ शकते.

घेतलेल्या सेलच्या खंडित गाळामुळे RNA-केवळ स्तंभ निर्माण होईल जो RNA शोषण ऑपरेशन केल्यावर ब्लॉक केला जाईल (चरण 6 पहा).सेल मोडतोड चोखले जाऊ नये म्हणून आम्ही या supernatant चे शोषण करताना काळजीपूर्वक शिफारस करतो.

3. नमुना प्रारंभिक रक्कम खूप जास्त आहे.

अत्याधिक नमुन्याचा वापर केल्याने अपूर्ण नमुना विखंडन किंवा बफर PSL1 द्वारे अपूर्ण सेल लिसिस होईल, परिणामी शुद्धीकरणादरम्यान शुद्धीकरण स्तंभात अडथळा निर्माण होईल.प्लांट टोटल आरएनए आयसोलेशन किट प्रत्येक एकल शुद्ध ऑपरेटिंग नमुना 50 मिग्रॅ आहे.पॉलिओल पॉलिसेकेराइड्सच्या वनस्पती नमुन्यांसाठी, आम्ही शिफारस करतो की तुम्ही प्लांट टोटल आरएनए आयसोलेशन किट प्लस वापरून पहा.

4. सेंट्रीफ्यूजचे तापमान खूप कमी आहे.

संपूर्ण आरएनए अलगाव आणि शुद्धीकरण प्रक्रिया खोलीच्या तपमानावर चालते (20-25°सी), नमुना ऊतक द्रव नायट्रोजनने तुटलेला आहे याशिवाय. काही क्रायोजेनिक सेंट्रीफ्यूजचे तापमान 20 पेक्षा कमी असते℃, ज्यामुळे DNA-क्लीनिंग कॉलम आणि/किंवा RNA-केवळ कॉलम ब्लॉक होऊ शकतो.असे झाल्यास, सेंट्रीफ्यूज तापमान 20-25 वर सेट करा℃, आणिलिसिस मिश्रण आणि/किंवा इथेनॉल-मिश्रित सुपरनॅटंट 37 पर्यंत गरम केले असल्याची खात्री करा°C.

कोणताही आरएनए काढला नाही किंवा आरएनए उत्पन्न कमी नाही

पुनर्प्राप्ती कार्यक्षमतेवर परिणाम करणारे सहसा अनेक घटक असतात, जसे की: नमुना आरएनए सामग्री, ऑपरेशन पद्धत, उत्सर्जन मात्रा इ.

खालीलप्रमाणे सामान्य कारणांचे विश्लेषण:

1. ऑपरेशन दरम्यान बर्फाचे स्नान किंवा कमी तापमान (4°C) सेंट्रीफ्यूगेशन केले गेले.

सूचना: खोलीच्या तपमानावर चालवा (15-25°क) संपूर्ण प्रक्रियेत, बर्फाचे आंघोळ आणि कमी तापमानाचे सेंट्रीफ्यूगेशन करू नका.

2.नमुन्याचे अयोग्य जतन किंवा नमुन्याचे दीर्घकालीन जतन केल्यामुळे आरएनए खराब झाले आहे.

शिफारस: ताजे गोळा केलेले नमुने द्रव नायट्रोजनमध्ये त्वरीत गोठवले जावे आणि नंतर -80 डिग्री सेल्सिअस तापमानात दीर्घकाळ साठवले जावे, नमुने वारंवार गोठणे आणि वितळणे टाळा;किंवा RNA स्टॅबिलायझर RNAlater द्रावणात (प्राण्यांचे नमुने) नमुने ताबडतोब भिजवा.

3. अपुरा नमुना विखंडन आणि लिसिसमुळे शुद्धीकरण स्तंभात अडथळा निर्माण होतो.

सूचना: टिश्यू पीसताना, कृपया टिश्यू पुरेशा प्रमाणात ग्राउंड असल्याची खात्री करा आणि त्वरीत पूर्व-तयार बफर PSL1 मध्ये हस्तांतरित करा (बीटा-एमईचे योग्य प्रमाण जोडले गेले असल्याची पुष्टी करा, प्रक्रियेची पायरी 1 पहा).

4.Eluent चुकीच्या पद्धतीने जोडले गेले.

सूचना: RNase-फ्री ddH2O शुद्धीकरण स्तंभाच्या झिल्लीच्या मध्यभागी ड्रिप केले असल्याची खात्री करा.

5. परिपूर्ण इथेनॉलचे योग्य प्रमाण बफर PSL2 किंवा बफर PRW2 मध्ये जोडले गेले नाही.

सूचना: कृपया सूचनांचे अनुसरण करा, Buffer PSL2 आणि Buffer PRW2 मध्ये परिपूर्ण इथेनॉलचे योग्य प्रमाण जोडा आणि किट वापरण्यापूर्वी चांगले मिसळा.

6.उती नमुन्याचे प्रमाण अयोग्य आहे.

सूचना: Buffer PSL1 च्या 500 μl प्रति 50 mg टिश्यू वापरा.जास्त ऊती वापरल्याने काढलेल्या आरएनएचे प्रमाण कमी होईल आणि परिणामी आरएनएची शुद्धता देखील कमी होईल.आम्ही जोरदार शिफारस करतो की प्रारंभिक नमुना डोस प्रति RNA निष्कर्षण ऑपरेशन 50 mg पेक्षा जास्त नसावा.

7. अयोग्य उत्सर्जन खंड किंवा अपूर्ण उत्सर्जन.

सूचना: शुध्दीकरण स्तंभाची एल्युएंट व्हॉल्यूम 50-200 μl आहे;जर उत्सर्जनाचा परिणाम समाधानकारक नसेल, तर खोलीच्या तपमानावर प्रीहीटेड RNase-फ्री ddH2O, जसे की 5-10 मिनिटे जोडल्यानंतर वेळ वाढवण्याची शिफारस केली जाते.

8. BufferPRW2 ने धुतल्यानंतर शुद्धीकरण स्तंभात इथेनॉल अवशेष असतात.

सूचना: जर रिकामी नळी 1 मिनिटांसाठी सेंट्रीफ्यूज केली असेल आणि बफर PRW2 मध्ये धुतल्यानंतरही इथेनॉल शिल्लक असेल, तर तुम्ही रिकाम्या नळीच्या सेंट्रीफ्यूगेशनची वेळ 2 मिनिटांपर्यंत वाढवू शकता किंवा अवशिष्ट इथानॉल पूर्णपणे काढून टाकण्यासाठी शुध्दीकरण स्तंभ 5 मिनिटांसाठी खोलीच्या तपमानावर ठेवू शकता.

9. किटचा वापर चुकीच्या पद्धतीने झाला.

सूचना: पॉलीफेनॉलिक पॉलिसेकेराइड्सच्या वनस्पतींच्या नमुन्यांसाठी, प्लांट टोटल आरएनए आयसोलेशन किट सारख्या सामान्य किटचा वापर करून आदर्श आरएनए नमुने मिळू शकत नाहीत.आम्ही तुम्हाला Plant Total RNA IsolationKit Plus वापरण्याची शिफारस करतो, जे विशेषत: पॉलिफेनोलिक पॉलिसेकेराइड वनस्पतींच्या नमुन्यांसाठी डिझाइन केलेले आहे.पॉलीफेनॉल आणि पॉलिसेकेराइड वनस्पतींच्या नमुन्यांमधून आरएनए काढण्यासाठी खास विकसित केलेली किट.

OD260/OD280 मूल्य कमी आहे

ddH2O सह आरएनए इल्युशन आणि स्पेक्ट्रोफोटोमीटर रीडिंगसाठी वापरल्याचा परिणाम कमी OD260/OD280 मूल्यांमध्ये होतो.तुलनेने योग्य OD260/OD280 मूल्ये मिळविण्यासाठी आम्ही 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 (RNase-फ्री ddH2O ऐवजी) वापरण्याची शिफारस करतो, पृष्ठ 19 वर “RNA एकाग्रता आणि शुद्धीकरण परीक्षण” पहा.

शुद्ध केलेले आरएनए खराब झाले आहे

शुद्ध RNA ची गुणवत्ता नमुना संरक्षण, RNase दूषित होणे आणि हाताळणी यांसारख्या घटकांशी संबंधित आहे.

सामान्य कारणांचे विश्लेषण:

1. ऊतींचे नमुने संकलनानंतर वेळेत साठवले गेले नाहीत.

शिफारस: ऊतींचे नमुने गोळा केल्यानंतर वेळेत वापरले जात नसल्यास, कृपया ते कमी तापमानात द्रव नायट्रोजनमध्ये ताबडतोब साठवा किंवा द्रव नायट्रोजनमध्ये द्रुत गोठल्यानंतर दीर्घकालीन साठवणुकीसाठी ते -80°C वर हस्तांतरित करा, किंवा RNA स्टॅबिलायझर RNAlater द्रावणात (प्राण्यांचे नमुने) ताबडतोब बुडवा.RNA काढण्यासाठी, ताजे गोळा केलेले ऊतींचे नमुने वापरण्याचा प्रयत्न करा.

2.उतींचे नमुने वारंवार गोठवणे आणि वितळणे.

सूचना: ऊतींचे नमुने साठवताना, संवर्धनासाठी त्यांचे लहान तुकडे करणे आणि नमुने वारंवार गोठवल्यामुळे आणि वितळल्यामुळे होणारे RNA ची झीज टाळण्यासाठी त्यांचा वापर करताना त्यातील काही भाग काढून टाकणे चांगले.

3.RNase ऑपरेशन रूममध्ये सादर केले जाते किंवा डिस्पोजेबल हातमोजे, मास्क इ.

सूचना: RNA काढण्याचे प्रयोग वेगळे RNA ऑपरेशन्समध्ये उत्तम प्रकारे केले जातात आणि प्रयोगापूर्वी प्रयोगशाळेतील टेबल स्वच्छ केले जावे, आणि RNase च्या प्रवेशामुळे RNA ची मोठ्या प्रमाणात होणारी झीज टाळण्यासाठी प्रयोगादरम्यान डिस्पोजेबल हातमोजे आणि मुखवटे घालावेत.

4. वापरादरम्यान RNase द्वारे अभिकर्मक दूषित होतो.

सूचना: संबंधित प्रयोगांसाठी वनस्पती एकूण आरएनए एक्सट्रॅक्शन किटच्या नवीन मालिकेने बदला.

5. आरएनए मॅनिपुलेशनसाठी वापरल्या जाणार्‍या सेंट्रीफ्यूज ट्यूब आणि विंदुक टिपा RNase द्वारे दूषित आहेत.

सूचना: आरएनए काढण्यासाठी वापरल्या जाणार्‍या सेंट्रीफ्यूज ट्यूब, पिपेट टिप्स, विंदुक इ. सर्व RNase-मुक्त असल्याची खात्री करा.

सूचना पुस्तिका:

प्लांट टोटल आरएनए आयसोलेशन किट प्लस इंस्ट्रक्शन मॅन्युअल