A260/A230 चे कमी प्रमाण सामान्यतः 230nm वर जास्तीत जास्त शोषण तरंगलांबी असलेल्या अशुद्धतेमुळे होते.या अशुद्धतेमध्ये काय समाविष्ट आहे ते पाहूया:

• सामान्य प्रदूषक	शोषण तरंगलांबी	गुणोत्तर प्रभाव
  प्रथिने	~230nm आणि 280nm	A ची एकाचवेळी कपात260/A 280आणि ए260/A 280गुणोत्तर
  ग्वानिडाइन मीठ	220-240 एनएम	ए कमी करा260/A 280प्रमाण
  फिनॉल	~270nm	-
  ट्रायझोल	~230nm आणि 270nm	ए कमी करा260/A 280प्रमाण
  EDTA	~230nm	ए कमी करा260/A 280प्रमाण
  इथेनॉल	230-240 एनएम	ए कमी करा260/A 280प्रमाण

 
 
 
सामान्य प्रदूषकांचे शोषण तरंगलांबी आणि कॉन्ट्रास्ट मूल्य

Pरोटीन दूषित होणे
प्रथिने प्रदूषण हे न्यूक्लिक अॅसिड काढण्याच्या प्रक्रियेतील सर्वात सामान्य प्रदूषण म्हणून ओळखले जाऊ शकते.प्रथिने वरच्या जलीय अवस्था आणि खालच्या दरम्यान अस्तित्वात आहेतसेंद्रियटप्पाप्रदूषणामुळे एकाच वेळी A260/A280 आणि A260/A230 चे गुणोत्तर कमी होईल आणि A260/A230 चे गुणोत्तर A260/A280 च्या गुणोत्तरापेक्षा अधिक स्पष्टपणे बदलेल.
त्यानंतरच्या दरम्यानउलट प्रतिलेखनor qPCR प्रतिक्रिया, प्रथिने अवशेष एंझाइमच्या कार्यामध्ये अडथळा आणू शकतात किंवा व्यत्यय आणू शकतात.प्रथिने दूषित होण्यापासून दूर राहण्याचा सर्वोत्तम मार्ग म्हणजे सुपरनॅटंटची आकांक्षा घेत असताना "अधिक पेक्षा कमी, अनेक वेळा लहान रक्कम" हे तत्त्व लक्षात ठेवणे.

2. ग्वानिडिनियम प्रदूषण
हायड्रोक्लोराइड (GuHCl) आणि guanidine thiocyanate (GTC) मध्ये प्रथिने कमी करण्याचा प्रभाव असतो, जे न्यूक्लिक अॅसिड काढण्याच्या प्रक्रियेदरम्यान पेशींच्या पडद्याला त्वरीत नष्ट करू शकतात, ज्यामुळे प्रथिने विकृत होतात आणि वर्षाव होतो.GuHCl आणि GTC ची शोषण तरंगलांबी 220-240 nm दरम्यान आहे आणिअवशिष्ट ग्वानिडिनियम मीठ A260/A230 चे प्रमाण कमी करेल.जरी अवशिष्ट ग्वानिडिनियम मीठ प्रमाण कमी करेल,डाउनस्ट्रीम प्रयोगांवर परिणाम प्रत्यक्षात नगण्य आहे.

3. ट्रायझोल दूषित होणे
ट्रायझोलचा मुख्य घटक फिनॉल आहे.फिनॉलचे मुख्य कार्य म्हणजे पेशी नष्ट करणे आणि पेशींमध्ये प्रथिने आणि न्यूक्लिक अॅसिड पदार्थ सोडणे.जरी फिनॉल प्रभावीपणे प्रथिने नष्ट करू शकते, तरीही ते RNase क्रियाकलाप पूर्णपणे रोखू शकत नाही.म्हणून, अंतर्जात आणि बहिर्जात RNase प्रतिबंधित करण्यासाठी TRIzol मध्ये 8 -hydroxyquinoline , guanidine isothiocyanate , β-mercaptoethanol इ. जोडले जातात.
सेल्युलर आरएनए काढताना, ट्रायझोल पेशींना झपाट्याने लायझ करू शकते आणि पेशींमधून बाहेर पडलेल्या न्यूक्लिझला प्रतिबंध करू शकते आणि अवशिष्ट ट्रायझोल A260/A230 चे प्रमाण लक्षणीयरीत्या कमी करेल.
प्रक्रिया पद्धत: सेंट्रीफ्यूजिंग करताना, हे लक्षात घेतले पाहिजे की ट्रायझोलमधील फिनॉल 4° आणि खोलीच्या तापमानाच्या स्थितीत पाण्याच्या टप्प्यात सहजपणे विरघळते.

4. इथेनॉल अवशेष
DNA ला बांधलेले मीठ आयन विरघळवताना अंतिम प्रक्रियेत इथेनॉलचा वापर DNA मध्ये अवक्षेपण करण्यासाठी केला जातो.सर्वात जास्त शोषण तरंगलांबीचे शोषण शिखरइथेनॉल देखील 230-240 एनएम आहे, जेA260/A230 चे प्रमाण देखील कमी करेल.
इथेनॉलचे अवशेष टाळण्याची पद्धत अंतिम उत्सर्जनाच्या वेळी दोनदा पुनरावृत्ती केली जाऊ शकते.फ्युम हुडइल्युशनसाठी बफर जोडण्यापूर्वी इथेनॉल पूर्णपणे बाष्पीभवन होण्यासाठी दोन मिनिटांसाठी.
तथापि, हे ज्ञात असले पाहिजे की गुणोत्तर हे केवळ आरएनए गुणवत्तेचे मूल्यमापन निर्देशांक आहे.वर नमूद केलेल्या ऑपरेशन्सचे काटेकोरपणे नियमन केल्यास, गुणोत्तर आणि मानक श्रेणीमधील विचलनाचा डाउनस्ट्रीम प्रयोगांवर फारसा प्रभाव पडणार नाही.
संबंधित उत्पादने:
प्राणी एकूण आरएनए अलगाव किट
प्लांट टोटल आरएनए आयसोलेशन किट
सेल एकूण आरएनए अलगाव किट
प्लांट टोटल आरएनए आयसोलेशन किट प्लस