1. आरएनए सोल्यूशनचे शोषण शोधा

280, 320, 230, आणि 260 nm चे शोषण अनुक्रमे न्यूक्लिक अॅसिड, पार्श्वभूमी (सोल्यूशन टर्बिडिटी), मीठ एकाग्रता आणि प्रथिने सारख्या सेंद्रिय पदार्थांची मूल्ये दर्शवते.साधारणपणे फक्त OD260/OD280 (गुणोत्तर, R) पहा.जेव्हा 1.8~2.0, तेव्हा आम्हाला वाटते की RNA मधील प्रथिने किंवा इतर सेंद्रिय पदार्थांचे प्रदूषण सहन केले जाऊ शकते, परंतु हे लक्षात घेतले पाहिजे की जेव्हा शोषण शोधण्यासाठी ट्रिसचा वापर बफर म्हणून केला जातो तेव्हा R चे मूल्य 2 पेक्षा जास्त असू शकते (सामान्यतः ते <2.2 असावे).जेव्हा R<1.8, तेव्हा द्रावणातील प्रथिने किंवा इतर सेंद्रिय पदार्थांचे प्रदूषण अधिक स्पष्ट होते आणि RNA चे भवितव्य गरजेनुसार ठरवता येते.जेव्हा R> 2.2, याचा अर्थ असा की RNA एकल न्यूक्लिक अॅसिडमध्ये हायड्रोलायझ केले गेले आहे.
 
2.आरएनएचा इलेक्ट्रोफोरेटिक नमुना
सामान्यतः, आरएनए इलेक्ट्रोफोरेसीससाठी डिनेचरिंग जेल वापरले जाते, परंतु जर ते केवळ आरएनएची गुणवत्ता शोधण्यासाठी असेल तर, डिनेचरिंग जेल आवश्यक नसते आणि सामान्य अॅग्रोज जेल वापरता येते.इलेक्ट्रोफोरेसीसचा उद्देश 28S आणि 18S बँडची अखंडता आणि त्यांचे गुणोत्तर किंवा mRNA स्मीअरची अखंडता शोधणे आहे.साधारणपणे, जर 28S आणि 18S बँड चमकदार, स्पष्ट आणि तीक्ष्ण आहेत (बँडच्या कडा स्पष्ट आहेत) आणि 28S ची चमक 18S बँडच्या दुप्पट असल्यास, आम्ही RNA ची गुणवत्ता चांगली असल्याचे समजतो.
वरील दोन पद्धती आहेत ज्या आपण सामान्यतः वापरतो, परंतु या दोन्ही पद्धतींपैकी कोणतेही RNA द्रावणामध्ये अवशिष्ट RNase आहे की नाही हे स्पष्टपणे सांगू शकत नाही.जर द्रावणात फारच कमी प्रमाणात RNase असेल तर, वरील पद्धतीद्वारे ते शोधणे आपल्यासाठी कठीण आहे, परंतु त्यानंतरच्या बहुतेक एन्झाईमॅटिक प्रतिक्रिया 37 अंशांपेक्षा जास्त आणि दीर्घ काळासाठी केल्या जातात.अशाप्रकारे, जर आरएनए सोल्युशनमध्ये फारच कमी प्रमाणात RNase असेल तर नंतरच्या प्रयोगांमध्ये त्यांची भूमिका बजावण्यासाठी अतिशय योग्य वातावरण आणि वेळ असेल आणि अर्थातच यावेळी प्रयोग थंड असेल.खाली आम्ही एक पद्धत सादर करतो जी RNA सोल्युशनमध्ये अवशिष्ट RNase आहे की नाही याची पुष्टी करू शकते.
 
3. उष्णता संरक्षण चाचणी
नमुना एकाग्रतेनुसार, RNA सोल्यूशनमधून दोन 1000 ng RNA काढा आणि ते 0.5 मिली सेंट्रीफ्यूज ट्यूबमध्ये जोडा, आणि pH 7.0 Tris बफरसह एकूण 10 ul च्या व्हॉल्यूममध्ये पूरक करा आणि नंतर ट्यूबची टोपी सील करा.त्यापैकी एकाला 70 डिग्री सेल्सिअस तापमानाच्या पाण्याच्या आंघोळीत ठेवा आणि 1 तास उबदार ठेवा.दुसरा भाग -20 डिग्री सेल्सिअस रेफ्रिजरेटरमध्ये 1 तासासाठी ठेवला होता.वेळ संपल्यावर, इलेक्ट्रोफोरेसीससाठी दोन नमुने काढा.इलेक्ट्रोफोरेसीस पूर्ण झाल्यानंतर, दोघांच्या इलेक्ट्रोफोरेटिक बँडची तुलना करा.जर दोघांचे बँड एकसमान असतील किंवा त्यांच्यात काही महत्त्वाचा फरक नसेल (अर्थातच, त्यांचे बँड देखील पद्धत 2 मधील अटी पूर्ण करतात), तर याचा अर्थ असा की RNA सोल्युशनमध्ये कोणतेही अवशिष्ट RNase प्रदूषण नाही आणि RNA ची गुणवत्ता खूप चांगली आहे.याउलट, जर 70°C वर उष्मायन केलेला नमुना स्पष्ट ऱ्हास दर्शवितो, तर हे सूचित करते की RNA द्रावणात RNase दूषितता आहे.
 
2 आरएनए काढण्यासाठी प्रायोगिक पद्धती आणि तंत्रे
आरएनए काढताना आपल्याला ज्या समस्या येतात त्या आहेत: (१) आरएनए उत्पन्न कमी आहे;(2) आरएनएमध्ये गंभीर मीठ प्रदूषण आहे;(३) आरएनएमध्ये गंभीर सेंद्रिय विलायक प्रदूषण आहे;(4) नमुना खराब होणे आणि इतर समस्या
 
1. सामान्यतः वापरले एकूण आरएनए निष्कर्षण अभिकर्मक
ग्वानिडाइन आयसोथिओसायनेट पद्धत आणि ट्रायझोल पद्धत प्राण्यांच्या ऊती आणि प्राण्यांच्या पेशींमधून एकूण आरएनए काढण्यासाठी सर्वात सामान्यपणे वापरल्या जाणार्‍या पद्धती आहेत.हे विशेषतः लहान नमुने आणि ऊतींसाठी योग्य आहे जे काढणे विशेषतः कठीण आहे, जसे की ससाच्या त्वचेपासून आणि प्राण्यांच्या संयोजी ऊतकांमधून एकूण आरएनए काढणे;याव्यतिरिक्त, ट्रायझोल, एक सामान्य-उद्देशीय लिसिस अभिकर्मक म्हणून, वनस्पतीच्या ऊती, जीवाणू, बुरशी आणि इतर उती काढण्यासाठी देखील वापरला जाऊ शकतो.कॅमेलिया ओलिफेरा, चहाची पाने, रेपसीड इत्यादी पॉलिसेकेराइड्स आणि पॉलिफेनॉल असलेल्या वनस्पतींच्या ऊतींसाठी, एकूण आरएनए काढण्यासाठी CTAB पद्धत देखील वापरली जाऊ शकते.

पारंपारिक पद्धत म्हणून, दुहेरी-स्तंभ पद्धत देखील तिच्या सामान्य तापमान ऑपरेशनमुळे खूप लोकप्रिय आहे, RNase जोडण्याची आवश्यकता नाही आणि सुरक्षितता - काढण्यासाठी क्लोरोफॉर्म, फिनॉल आणि इतर सेंद्रिय अभिकर्मक नाहीत.(शिफारस केलेली उत्पादने )