Escherichia Coli O157: H7 न्यूक्लिक अॅसिड डिटेक्शन किट (PCR फ्लोरोसेंट प्रोब मेथड/ल्योफिलायझेशन)
किटचे वर्णन:
मांजर.ना.FP103
याचा वापर अन्न, खाद्य, पाण्याचे नमुने आणि पर्यावरणीय नमुन्यांमध्ये E. coli O157:H7 चा जलद शोध आणि तपासणीसाठी केला जातो.
वर्णने
साठी वापरले जातेअन्न, खाद्य, पाण्याचे नमुने आणि पर्यावरणीय नमुन्यांमध्ये E. coli O157:H7 ची जलद तपासणी आणि तपासणी.
[चाचणीचे तत्व]
फ्लोरोसेंट पीसीआर तंत्रज्ञानाच्या तत्त्वानुसार, विशिष्ट प्राइमर्स आणि टाकमन प्रोब्सची रचना Escherichia coli O157: H7 च्या विशिष्ट जनुकासाठी केली गेली आहे, आणि फ्लूरोसंट PCR उपकरणाद्वारे शोधली गेली आहे, जेणेकरून Escherichia coli O157: H7 चे DNA चे गुणात्मक शोध लक्षात येईल.
किट सामग्री
टीप: ROX चॅनेल प्रोब समाविष्ट नाही.
| Cघटक | तपशील | Qएकता |
| बफर ए | ट्यूब | 1 |
| बफर बी | ट्यूब | 1 |
| सकारात्मक नियंत्रण | ट्यूब | 1 |
| नकारात्मक नियंत्रण | ट्यूब | 1 |
अपेक्षित वापर
साठी वापरले जाते अन्न, खाद्य, पाण्याचे नमुने आणि पर्यावरणीय नमुन्यांमध्ये E. coli O157:H7 ची जलद तपासणी आणि तपासणी.
स्टोरेज अटी आणि कालबाह्यता तारीख
अंधारात -20 डिग्री सेल्सियस वर साठवा आणि वारंवार गोठणे आणि वितळणे टाळा.
वैधता कालावधी 12 आहेमहिने, आणि उत्पादन तारीख बाह्य पॅकेजिंगवर दर्शविली आहे.
उपकरणे आणि उपभोग्य वस्तू
फ्लोरोसेंट क्वांटिटेटिव्ह पीसीआर इन्स्ट्रुमेंट, पिपेट गन आणि मॅचिंग टिप्स, व्हर्टेक्स शेकर, मिनी सेंट्रीफ्यूज.
वापर
1. नमुना प्रक्रिया
1.1 नमुना प्रकार: हे किट अन्न, खाद्य, पाण्याचे नमुने आणि Escherichia coli O157:H7 द्वारे दूषित झाल्याचा संशय असलेल्या इतर नमुन्यांसाठी योग्य आहे.खोल-प्रक्रिया केलेले मांस उत्पादने, पेये आणि रंगद्रव्ये असलेल्या इतर पदार्थांसाठी, फ्लूरोसेन्स सिग्नल संकलनावर परिणाम होऊ नये म्हणून त्यांना धुवावे लागेल.
1.2 नमुना प्रक्रिया: Escherichia coli O157: H7 च्या नमुना तयार करणे, संवर्धन संस्कृती आणि वेगळे करणे यासाठी "GB 4789.10-2016 Food Safety National Standard Food Microbiological Examination of Escherichia coli O157: H7 चाचणी" पहा.
- Nयुक्लिक ऍसिड काढणे
1.5 एमएल सेंट्रीफ्यूज ट्यूबमध्ये 20 एमएल संवर्धन द्रावण घ्या, त्यात 200 μL मायक्रोबियल लायसेट घाला (अतिरिक्त किट आवश्यक आहे), 30 सेकंदांसाठी भोवरा, थोडक्यात सेंट्रीफ्यूज करा आणि बाजूला ठेवा.
टिपा: लाइसेटमधून न्यूक्लिक अॅसिड काढणे 10 मिनिटांत पूर्ण झाले पाहिजे आणि ते जास्त काळ साठवले जाऊ शकत नाही.
3. न्यूक्लिक अॅसिड प्रवर्धन
3.1 फ्लोरोसेंट परिमाणात्मक PCR साधन वापरण्यासाठी चालू करा.
किटमधून बफर ए आणि बफर बी, त्यांना पूर्णपणे वितळवा आणि थोडक्यात सेंट्रीफ्यूज करा.प्रत्येक PCR प्रतिक्रिया ट्यूबमध्ये 18 μL बफर A आणि 2 μL बफर B जोडा.नंतर प्रत्येक नकारात्मक नियंत्रण, काढलेले न्यूक्लिक अॅसिड आणि पॉझिटिव्ह कंट्रोल पीसीआर रिअॅक्शन ट्यूबमध्ये 5 एमएल जोडा, नळ्या कॅप करा आणि थोडक्यात सेंट्रीफ्यूज करा.
3.3 PCR प्रतिक्रिया ट्यूब फ्लूरोसंट PCR मशीनवर हस्तांतरित करा, आणि प्रवर्धन प्रयोग करण्यासाठी खालील प्रक्रिया वापरा: प्रतिक्रिया प्रणालीसाठी 25 mL निवडा, प्रत्येक चक्रासाठी 60°C वर फ्लूरोसेन्स सिग्नल गोळा करा आणि शोध चॅनेलसाठी FAM निवडा.
| पाऊल | कार्यक्रम | चक्रांची संख्या |
| 1 | 37℃ 5मि | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3 मि | 1 |
| 3 | 95°C 15से | ४० |
| 60℃ 30s (फ्लोरोसेन्स गोळा करा) |
समस्या विश्लेषणासाठी मार्गदर्शक
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
कोणतेही आरएनए काढले जाऊ शकत नाही किंवा न्यूक्लिक अॅसिडचे उत्पादन कमी आहे
सहसा पुनर्प्राप्ती कार्यक्षमतेवर परिणाम करणारे अनेक घटक असतात, जसे की: नमुना आरएनए सामग्री, ऑपरेशनची पद्धत, उत्सर्जन मात्रा इ..
सामान्य कारणांचे विश्लेषण:
1. ऑपरेशन दरम्यान बर्फ आंघोळ किंवा कमी-तापमान (4 ° से) सेंट्रीफ्यूगेशन.
सूचना: खोलीचे तापमान (15-25 ° से) ऑपरेशन, कधीही बर्फ आंघोळ करू नका आणि कमी तापमान सेंट्रीफ्यूज.
2. अयोग्य नमुना संचयन किंवा नमुना संचयन बराच काळ.
सूचना: नमुने -80 डिग्री सेल्सिअस तापमानात साठवा किंवा द्रव नायट्रोजनमध्ये गोठवा आणि वारंवार फ्रीझ-थॉ वापर टाळा;RNA काढण्यासाठी नव्याने गोळा केलेले नमुने वापरण्याचा प्रयत्न करा.
3. अपुरा नमुना लिसिस
शिफारस: कृपया खात्री करा की नमुना आणि कार्यरत द्रावण (लिनियर ऍक्रिलामाइड) पूर्णपणे मिसळले गेले आहे आणि खोलीच्या तापमानात (15-25 डिग्री सेल्सिअस) 10 मिनिटे उबवलेले आहे.
4.Eluent चुकीच्या पद्धतीने जोडले गेले
शिफारस: RNase-फ्री ddH2O शुद्धीकरण स्तंभाच्या पडद्याच्या मध्यभागी जोडलेले असल्याची खात्री करा
5.बफर viRW2 मध्ये निर्जल इथेनॉलची अयोग्य मात्रा
सूचना: कृपया सूचनांचे अनुसरण करा, बफर viRW2 मध्ये निर्जल इथेनॉलची योग्य मात्रा जोडा आणि किट वापरण्यापूर्वी ते चांगले मिसळा.
6.नमुन्याचा अयोग्य वापर.
सूचना: बफर viRL च्या 500μl प्रति नमुना 200μl.नमुन्याच्या जास्त प्रमाणामुळे RNA काढण्याचा दर कमी होईल.
7. अयोग्य उत्सर्जन खंड किंवा अपूर्ण उत्सर्जन.
सूचना: शुध्दीकरण स्तंभाचा एल्युएंट व्हॉल्यूम 30-50μl आहे;जर उत्सर्जन परिणाम समाधानकारक नसेल, तर प्री-हीटेड RNase-फ्री ddH जोडण्याची शिफारस केली जाते.2ओ आणि खोलीच्या तपमानावर ठेवण्याची वेळ वाढवा, जसे की 5-10 मिनिटे
8. बफर viRW2 मध्ये धुवल्यानंतर शुद्धीकरण स्तंभात इथेनॉल अवशेष असतात.
सूचना: बफर viRW2 मध्ये स्वच्छ धुवल्यानंतर आणि 2 मिनिटांसाठी रिकाम्या-ट्यूब सेंट्रीफ्यूगेशननंतरही इथेनॉल शिल्लक राहिल्यास, उर्वरित इथेनॉल पूर्णपणे काढून टाकण्यासाठी रिकाम्या-ट्यूब सेंट्रीफ्यूगेशननंतर शुध्दीकरण स्तंभ खोलीच्या तपमानावर 5 मिनिटांसाठी सोडला जाऊ शकतो.
शुद्ध RNA रेणूंचा ऱ्हास
शुद्ध केलेल्या RNA ची गुणवत्ता सॅम्पल स्टोरेज, RNase दूषित होणे आणि ऑपरेशन यांसारख्या घटकांशी संबंधित आहे.
सामान्य कारणांचे विश्लेषण:
1. गोळा केलेले नमुने वेळेत जतन केले गेले नाहीत.
सूचना: जर नमुना संकलनानंतर वेळेत वापरला गेला नाही, तर कृपया ते -80 ℃ किंवा द्रव नायट्रोजनवर ताबडतोब साठवा.RNA रेणू काढण्यासाठी, शक्य असेल तेव्हा ताजे गोळा केलेले नमुने वापरण्याचा प्रयत्न करा.
2. गोळा केलेले नमुने वारंवार गोठत होते आणि वितळत होते.
सूचना: नमुना संकलन आणि साठवण दरम्यान वारंवार गोठणे आणि वितळणे (एकापेक्षा जास्त वेळा नाही) टाळा, अन्यथा न्यूक्लिक अॅसिडचे उत्पादन कमी होईल.
3.RNase ऑपरेटिंग रूममध्ये सादर करण्यात आले किंवा डिस्पोजेबल हातमोजे, मुखवटे इ. परिधान केले गेले नाहीत.
सूचना: आरएनए रेणूंचे निष्कर्षण प्रयोग वेगळ्या आरएनए ऑपरेशन रूममध्ये उत्तम प्रकारे केले जाते आणि प्रयोगापूर्वी प्रायोगिक सारणी साफ केली जाते.RNase परिचयामुळे होणारे RNA ऱ्हास टाळण्यासाठी प्रयोगादरम्यान डिस्पोजेबल हातमोजे आणि मास्क घाला.
4. वापरादरम्यान RNase द्वारे अभिकर्मक दूषित होतो.
सूचना: संबंधित प्रयोगांसाठी नवीन व्हायरल आरएनए आयसोलेशन किटने बदला.
5. सेंट्रीफ्यूज नलिका, विंदुक टिपा इत्यादींचे RNase दूषितीकरण. सूचना: सेंट्रीफ्यूज ट्यूब, विंदुक टिपा आणि विंदुक सर्व RNase-मुक्त असल्याची खात्री करा.
शुद्ध केलेल्या आरएनए रेणूंनी डाउनस्ट्रीम प्रयोगांवर परिणाम केला
शुध्दीकरण स्तंभाद्वारे शुद्ध केलेले आरएनए रेणू डाउनस्ट्रीम प्रयोगांवर परिणाम करतात जर तेथे जास्त मीठ आयन किंवा प्रथिने असतील, जसे की: रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन, नॉर्दर्न ब्लॉट इ..
1. एल्युटेड आरएनए रेणूंमध्ये मीठ आयन शिल्लक आहेत.
शिफारस: बफर viRW2 मध्ये निर्जल इथेनॉलची योग्य मात्रा जोडली गेली आहे याची खात्री करा, आणि ऑपरेटिंग निर्देशांवरील योग्य सेंट्रीफ्यूगेशन गतीनुसार शुद्धीकरण स्तंभ दोनदा धुवा; तरीही मीठ आयन शिल्लक असल्यास, तुम्ही शुद्धीकरण स्तंभात बफर viRW2 जोडू शकता आणि खोलीच्या तापमानाला 5 मिनिटांसाठी सोडू शकता.नंतर मीठ आयन दूषितता जास्तीत जास्त प्रमाणात काढून टाकण्यासाठी सेंट्रीफ्यूगेशन करा
2. एल्युटेड RNA रेणूंमध्ये इथेनॉल शिल्लक आहे
सूचना: बफर viRW2 द्वारे शुध्दीकरण स्तंभ स्वच्छ केल्याची पुष्टी केल्यावर, ऑपरेटिंग निर्देशांवरील केंद्रापसारक गतीनुसार रिक्त-ट्यूब सेंट्रीफ्यूगेशन करा.जर इथेनॉल शिल्लक असेल तर, रिकाम्या-ट्यूब सेंट्रीफ्यूगेशननंतर ते खोलीच्या तपमानावर 5 मिनिटे सोडले जाऊ शकते जेणेकरून उर्वरित इथेनॉल जास्तीत जास्त प्रमाणात काढून टाकावे.
सूचना पुस्तिका:
व्हायरल आरएनए अलगाव किट सूचना पुस्तिका
