(९६-वेल) क्विकइझी सेल डायरेक्ट आरटी-क्यूपीसीआर किट – एसवायबीआर ग्रीन I
वर्णने
द(96-वेल) QuickEasyTM सेल डायरेक्ट RT-qPCR किट-SYBR ग्रीन Iप्रदान करतेएक अद्वितीय लिसिस बफर प्रणालीto त्वरीत आरएनए सोडासुसंस्कृत पेशी पासूनRT-qPCR प्रतिक्रियांचे नमुने, वेळ घेणारे आणि कष्टदायक काढून टाकतातआरएनए शुद्धीकरण प्रक्रिया, आणि आवश्यक आरएनए टेम्पलेट प्राप्त करण्यासाठी फक्त 7 मिनिटे लागतात.द5× डायरेक्ट आरटी मिक्सआणि2× डायरेक्ट qPCR मिक्स-SYBRबॉक्समध्ये त्वरित प्रदान केले जाऊ शकते आणिप्रभावीपणे रिअल-टाइम परिमाणवाचक मिळवापीसीआर परिणाम.
5× डायरेक्ट RT मिक्स आणि 2× डायरेक्ट qPCR मिक्स-SYBR मध्ये मजबूत इनहिबिटर टॉलरन्स आहे, आणि कार्यक्षम रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन आणि विशिष्ट प्रवर्धनासाठी टेम्प्लेट म्हणून चाचणी करण्यासाठी नमुन्याच्या लाइसेटचा वापर करू शकतात.अभिकर्मकामध्ये आरएनएसाठी उच्च आत्मीयतेसह फोरजीन अद्वितीय रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस तसेच हॉट डी-टाक डीएनए पॉलिमरेझ, dNTPs, MgCl समाविष्ट आहे2 , प्रतिक्रिया बफर, PCR ऑप्टिमायझर आणि स्टॅबिलायझर , आणि नमुना जलद, सहज आणि अचूकपणे शोधण्यासाठी लिसिस बफरच्या संयोगाने वापरला जाऊ शकतो आणि त्यात उच्च संवेदनशीलता, मजबूत विशिष्टता आणि चांगली स्थिरता ही वैशिष्ट्ये आहेत.
किटचा उद्देश 96-सुसंस्कृत पेशींच्या सूक्ष्म-सिस्टम लिसिससाठी आहे, आणि त्यात चांगली एकसमानता आणि सुसंगतता आहे;किटचे घटक ९६ लिसिस रिअॅक्शन्स, ९६ रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन रिअॅक्शन्स आणि ९६×२ क्यूपीसीआर रिअॅक्शन्स देतात, जे ९६-वेल सेल प्लेटला एकवेळच्या वापरासाठी पूर्ण करू शकतात, वारंवार उघडणे, गोठणे आणि वितळणे यामुळे होणारे प्रदूषण टाळते आणि अभिकर्मक कार्यक्षमतेचे नुकसान टाळते.
किटचे घटक
| किट रचना ( 50 μएल लिसिस सिस्टम/20 μLRT प्रतिक्रिया प्रणाली /20μएल qPCR प्रतिक्रिया प्रणाली) | DRT-03011 | शेरा | |
| 96T | |||
| भागI | बफरCL | 5 मिली | सेललिसिस |
| फोरजीनप्रोटीज प्लस II | 100 μL | ||
| बफरST | ५०० μL | ||
| भाग II | डीएनएखोडरबर | 100 μL | |
| 5× डायरेक्ट आरटी मिक्स | 400 μL | RT | |
| 2× डायरेक्ट qPCR मिक्स-SYBR | 1 मीL × २ | qPCR | |
| 50× ROX संदर्भ डाई | 400µL | ||
| RNase- फुकटddH2 O | 1.7mL |
| |
| Mवार्षिक | 1 तुकडा | 1 सर्व्हिंग | |
*: लिसिस अभिकर्मक डीएनए इरेजर किटच्या भाग II मध्ये समाविष्ट केले आहे;सेल लिसिस, आरटी आणि क्यूपीसीआर घटक स्वतंत्रपणे खरेदी केले जाऊ शकतात.
वैशिष्ट्ये आणि फायदे
■साधे आणि प्रभावी : सेल डायरेक्ट आरटी तंत्रज्ञानासह, आरएनए नमुने फक्त 7 मिनिटांत मिळू शकतात.
■ नमुन्याची मागणी कमी आहे, कमीत कमी 10 पेशींची चाचणी केली जाऊ शकते.
■ उच्च थ्रूपुट: हे 384, 96, 24, 12, 6-वेल प्लेट्समध्ये संवर्धित पेशींमध्ये आरएनए पटकन शोधू शकते.
■ डीएनए इरेजर त्वरीत प्रकाशीत जीनोम काढून टाकू शकतो, त्यानंतरच्या प्रायोगिक परिणामांवर होणारा परिणाम मोठ्या प्रमाणात कमी करू शकतो.
■ ऑप्टिमाइझ केलेली RT आणि qPCR प्रणाली द्वि-चरण RT-PCR रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन अधिक कार्यक्षम आणि PCR अधिक विशिष्ट आणि RT-qPCR प्रतिक्रिया अवरोधकांना अधिक प्रतिरोधक बनवते.
किट अर्ज
अर्जाची व्याप्ती: सुसंस्कृत पेशी.
- नमुना लिसिसद्वारे सोडलेला RNA: फक्त या किटच्या RT-qPCR टेम्पलेटला लागू.
- किटचा वापर खालील उद्देशांसाठी केला जाऊ शकतो: जनुक अभिव्यक्ती विश्लेषण, siRNA-मध्यस्थ जीन सायलेन्सिंग इफेक्टची पडताळणी, औषध तपासणी इ.
स्टोरेज आणि शेल्फ लाइफ
या किटचा भाग I 4 वर संग्रहित केला पाहिजे℃;भाग II -20℃ वर संग्रहित केले पाहिजे.
फोरजीन प्रोटीज प्लस II 4 वर साठवले पाहिजे℃, -20℃ वर गोठवू नका.
अभिकर्मक 2×डायरेक्ट qPCR Mix-Takman -20 वर साठवले जावे℃अंधारात;वारंवार वापरल्यास, ते 4 वर देखील संग्रहित केले जाऊ शकते℃ अल्प-मुदतीच्या स्टोरेजसाठी (10 दिवसांच्या आत वापरा).
रिअल टाइम पीसीआर प्राइमर डिझाइन तत्त्वे
फॉरवर्ड प्राइमर आणि रिव्हर्स प्राइमर
रिअल टाइम पीसीआरसाठी, प्राइमर डिझाइन खूप महत्वाचे आहे.प्राइमर्स पीसीआर प्रवर्धनाच्या विशिष्टतेशी आणि कार्यक्षमतेशी संबंधित आहेत आणि खालील तत्त्वांच्या संदर्भात डिझाइन केले जाऊ शकतात:
- प्राइमर लांबी: 18-30bp.
- जीसी सामग्री: 40-60%.
- टीएम मूल्य: प्राइमर डिझाइन सॉफ्टवेअर, जसे की प्राइमर 5, प्राइमरचे टीएम मूल्य देऊ शकते.अपस्ट्रीम आणि डाउनस्ट्रीम प्राइमर्सची Tm मूल्ये शक्य तितक्या जवळ असावीत.Tm गणना सूत्र देखील वापरले जाऊ शकते: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).PCR करत असताना, 5 °C च्या प्राइमर Tm मूल्यापेक्षा कमी तापमान सामान्यत: अॅनिलिंग तापमान म्हणून निवडले जाते (अॅनलिंग तापमानातील संबंधित वाढ PCR प्रतिक्रियाची विशिष्टता वाढवू शकते).
- प्राइमर्स आणि पीसीआर उत्पादने:
- डिझाईन प्राइमर पीसीआर प्रवर्धन उत्पादनाची लांबी प्राधान्याने 100-150bp आहे.
- टेम्प्लेटच्या दुय्यम संरचनात्मक क्षेत्रामध्ये डिझाइन प्राइमर्स शक्य तितके टाळले पाहिजेत.
- अपस्ट्रीम आणि डाउनस्ट्रीम प्राइमर्सच्या 3′ टोकांच्या दरम्यान 2 किंवा अधिक पूरक बेस तयार करणे टाळा.
- प्राइमर 3′ टर्मिनल बेस 3 अतिरिक्त सलग G किंवा C सह उपस्थित असू शकत नाही.
- प्राइमरमध्ये स्वतःला पूरक संरचना असू शकत नाही, अन्यथा हेअरपिन रचना तयार होईल, ज्यामुळे पीसीआर प्रवर्धन प्रभावित होईल.
- ATCG प्राइमर अनुक्रमात शक्य तितक्या समान रीतीने वितरित केले जावे आणि 3′ टर्मिनल बेसला T म्हणून टाळावे.
परिशिष्ट1:Cएल डायरेक्टRT-qPCR किट घटकटी पूरक पॅक
1.सेल लिसिस सोल्यूशन
| सेल लिसिस सोल्यूशन | |||
| किटचे घटक (24-वेल लिसिस सिस्टम / विहीर) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 टी | ५०० टी | ||
| भागआय | बफर CL | 20 मि.ली | 100 मि.ली |
| फोरजीन प्रोटीज प्लस II | 400 μl | 1 मिली × 2 | |
| बफर एस.टी | 1 मिली × 2 | 10 मि.ली | |
| भागII | डीएनए इरेजर | 400 μl | 1 मिली × 2 |
| आरटी मिक्स | |
| किटचे घटक (20 μl प्रतिक्रिया प्रणाली) | DRT-01011-B1 |
| 200 टी | |
| 5× डायरेक्ट आरटी मिक्स | 800 μl |
| RNase-मुक्त ddH2O | 1.7 मिली × 2 |
| qPCR मिक्स | ||
| किटचे घटक (20 μl प्रतिक्रिया प्रणाली) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 टी | 1000 टी | |
| 2× डायरेक्ट qPCR मिक्स-ताकमान | 1 मिली × 2 | 1.7 मिली × 6 |
| 20× ROX संदर्भ डाई | 40 μl | 200 μl |
| RNase-मुक्त ddH2O | 1.7 मिली | 10 मि.ली |
सूचना पुस्तिका:
