RNase हा एक संवेदनशील शब्द आहे जो RNA काढण्याचे प्रयोग करणारे अनेक विद्यार्थी ऐकू इच्छित नाहीत.पूर्णपणे सशस्त्र, शेवटी अत्यंत विषारी अभिकर्मक फिनॉल आणि क्लोरोफॉर्मसह काढलेले आरएनए खराब झाले.मी समेट नाही!!!आज, प्रसिद्ध Rnase च्या उत्पत्तीवर एक नजर टाकूया.

Ribonuclease (RNase), किंवा RNase, एक न्यूक्लिझ आहे जो RNA ला लहान रेणूंमध्ये हायड्रोलायझ करू शकतो.RNase, एक लहान रेणू प्रोटीन म्हणून, असामान्यपणे स्थिर आहे .पारंपारिक उच्च तापमान आणि उच्च दाब स्टीम निर्जंतुकीकरण आणि प्रथिने अवरोधक पूर्णपणे निष्क्रिय करू शकत नाहीत.RNase ची स्थिरता प्रामुख्याने संरचनेतील डायसल्फाइड बॉण्ड्समधून येते.उदाहरणार्थ, बोवाइन स्वादुपिंडाच्या सामान्यतः वापरल्या जाणार्‍या RNase मध्ये फक्त 124 अमीनो ऍसिड असतात, परंतु त्यात 4 डायसल्फाइड बॉन्ड असतात.सल्फर बॉण्ड आणि डायसल्फाइड बॉण्ड RNase उत्कृष्ट थर्मल स्थिरता देतात.याव्यतिरिक्त, rnase चे तुलनेने लहान आण्विक वजन आहे आणि ते बर्‍याच प्रकरणांमध्ये त्याचे मूळ स्वरूप द्रुतपणे पुनर्संचयित करू शकते.

अत्यंत स्थिर असण्याव्यतिरिक्त,RNase प्रयोगशाळेत सर्वव्यापी आहेत .RNase ही जैविक संरक्षण यंत्रणा आहे.सेलसाठी, एक्सोजेनस आरएनए बहुधा प्राणघातक असतो.एक्सोजेनस डीएनएच्या तुलनेत, एक्सोजेनस आरएनए अनेकदा अधिक धोकादायक असतो.RNA आनंदाने लिप्यंतरित आणि अनुवादित आहे, म्हणून जवळजवळ सर्व जीवांनी बाह्य RNA च्या आक्रमणापासून बचाव करण्यासाठी RNases विकसित केले आहेत.त्यामुळे प्रयोगशाळेत लागवड केलेल्या जिवाणू पेशी आणि आरएनए काढणारे तुम्ही RNase चा सुगंध बाहेर टाकतात.मानवी शरीरातील द्रवांमध्ये (लाळ, अश्रू, इ.) मोठ्या प्रमाणात RNase असते, त्यामुळे RNA खराब झाल्यावर रडू नका.तुम्ही जितके रडता तितके RNA ऱ्हास होईल!!सिस्टर डाययू आरएनए काढण्यासाठी योग्य नाही!

याशिवाय, तुमच्या नाजूक त्वचेमध्ये भरपूर RNase असते आणि त्वचेला स्पर्श केलेले मार्कर, पिपेट्स, रेफ्रिजरेटरचे दरवाजे आणि दरवाजाच्या हँडलमध्ये देखील RNase असते.

खूप रॅम्बलिंगसह, RNases ला कसे सामोरे जायचे ते पाहूया.

आरएनए काढून टाकताना प्रत्येकजण विचार करणारी पहिली गोष्ट आहेDEPC(डायथिल पायरोकार्बोनेट).DEPC प्रामुख्याने RNase सक्रिय गट हिस्टिडाइनच्या इमिडाझोल रिंगसह एकत्रित करून प्रथिने काढून टाकते, ज्यामुळे एन्झाइमची क्रिया रोखते.0.1% DEPC चा Rnase वर काढण्याचा चांगला परिणाम होऊ शकतो, परंतु आम्हाला लक्ष देणे आवश्यक आहे की DEPC हे ज्ञात कार्सिनोजेन आहे, म्हणून ते वापरताना विशेष लक्ष दिले पाहिजे.

RNase साठी, आपल्याला दोन पैलूंपासून सुरुवात करावी लागेल,प्रथम अंतर्जात RNase च्या क्रियाकलापांना प्रतिबंधित करणे आहे

ट्रायझोलमध्ये असलेले ग्वानिडाइन आयसोथियोसायनेट आणि डीटीटी सारख्या पारंपारिक आरएनए एक्सट्रॅक्शन अभिकर्मक RNase चे डायसल्फाइड बंध उघडू शकतात, परंतु अजूनही काही RNase आहेत, विशेषत: ऊतींच्या नमुन्यांमध्ये, त्यामुळे कमी तापमानाकडे लक्ष द्या.

१.ऊतींचे नमुने बाहेर काढल्यानंतर लगेच द्रव नायट्रोजनमध्ये किंवा व्यावसायिक RNA संरक्षण द्रावणात बुडवा.

2.सेल नमुन्याचा आरएनए काढल्यानंतर, ते लिसिस सोल्युशनमध्ये घाला आणि बर्फाच्या पेटीवर लिसे करा.

3. पीसण्यासाठी द्रव नायट्रोजन वापरणे चांगले जेव्हा ऊतींचे नमुने एकरूप होतात.लिक्विड नायट्रोजनशिवाय इलेक्ट्रिक होमोजेनायझर वापरताना, होमोजेनेट अडॅप्टर पूर्णपणे प्री-कूलिंगकडे लक्ष द्या.

दुसरा exogenous DNase आहे

१.पूर्णपणे सशस्त्र व्हा, लॅब कोट घाला, मास्क घाला आणि नवीन हातमोजे घालण्याची खात्री करा (एवढी काटकसर करू नका! हे लक्षात घ्यावे की ट्रायझोल हे अत्यंत गंजणारे आहे, आणि ते हातमोजे द्वारे देखील खूप मजबूत आहे, त्यामुळे आपल्या हातांवर टपकू नका).

2.सर्व वापरलेल्या विंदुक टिपा, EP ट्यूब, पीसीआर ट्यूब आणि इतर उपकरणे डी-आरनेज उपचार करणे आवश्यक आहे.ते 0.1% DEPC मध्ये भिजवले जाऊ शकते आणि नंतर उच्च दाबाने दाबले जाऊ शकते.फ्यूम हुडमध्ये ऑपरेशनकडे लक्ष द्या.स्थानिक अत्याचारी एंजाइम काढून टाकण्यासाठी थेट उपभोग्य वस्तू खरेदी करू शकतात.

PS: मी तुम्हाला एक आळशी पद्धत सांगतो.जरी उच्च तापमान आणि उच्च दाब RNase पूर्णपणे काढून टाकू शकत नसले तरी ते त्याचा एक मोठा भाग काढून टाकेल.2 वेळा उच्च तापमान आणि उच्च दाबाचा चांगला प्रभाव पडतो आणि आरएनए काढण्याचा थोडासा परिणाम होतो.

3.अल्कोहोल प्रथिने नष्ट करू शकते,त्यामुळे RNA निष्कर्षण सारणी 75% अल्कोहोलने पुसली जाऊ शकते , आणि हातमोजे देखील अल्कोहोल सह फवारणी केली जाऊ शकते.

4.अंतिम RNA विरघळणारे द्रावण आणि सेंट्रीफ्यूज ट्यूब देखील डी-RNase उपचारित केले पाहिजे.DEPC पाणी हे सामान्यतः वापरले जाणारे RNA विरघळणारे द्रावण आहे.चला डीईपीसी पाण्याच्या योग्य तयारी पद्धतीबद्दल बोलूया (जेव्हा तुम्ही ते विकत घेता तेव्हा व्यावसायिक डीईपीसी पुन्हा पॅकेज करण्याचे लक्षात ठेवा)

1:1000 वाजता अल्ट्राप्युअर पाण्यात DEPC घाला, चांगले हलवा, रात्रभर 37°C वर उभे राहू द्या आणि 121°C वर उच्च तापमान आणि उच्च दाबाखाली 15 मिनिटे निर्जंतुक करा.DEPC पाणी 1ml aliquots मध्ये -20°C वर साठवले जाऊ शकते.

शेवटी, सारांश: कमी तापमान ही मुख्य गोष्ट आहे, उपभोग्य वस्तू चांगल्या प्रकारे हाताळल्या जातात, पूर्णपणे सशस्त्र आणि कमी बोलतात!

बरं, आजच्या रणनीतीसाठी तेच आहे.तुम्‍ही सांगितलेल्‍या सर्व आरएनए एकाग्रता आणि शुद्धतेसाठी मी तुम्‍हाला शुभेच्छा देतो.A260/A280 दोन्ही 2.0 आहेत!!!

अर्थात, आपण वापरल्यास एखोलीचे तापमान ऑपरेशन आरएनए निष्कर्षण किट, तुम्हाला वरील त्रासांचा सामना करावा लागणार नाही.

खोलीच्या तपमानावर ऑपरेशन, DNase न जोडता, 11 मिनिटांत पेशींमधून एकूण RNA काढतो आणि 30 मिनिटांत प्राण्यांच्या ऊती किंवा वनस्पतींमधून एकूण RNA काढतो.

चाचणी नमुन्यांसाठी, कृपया संपर्क साधा:overseas@foregene.com

संबंधित उत्पादने:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/