गोंद पुनर्प्राप्ती सुधारण्यासाठी टिपा

1. इलेक्ट्रोफोरेसीस दरम्यान नमुना लोड वाढवा.

2. ताजे तयार केलेले इलेक्ट्रोफोरेसीस बफर वापरा.

3. गोंद कापताना, गोंद कापण्याचे प्रमाण कमी करण्यासाठी फक्त पट्ट्यांसह गोंद कापण्याचा प्रयत्न करा: काही उद्देशाच्या तुकड्यांसह गोंद आवश्यक नाही, अन्यथा ते पुनर्प्राप्ती दरावर परिणाम करेल.

4. गोंदाचे दोन किंवा अधिक तुकडे वितळल्यानंतर, व्हॉल्यूम कितीही मोठा असला तरीही ट्यूब वापरा आणि त्याच स्तंभात स्थानांतरित करा.

5. सोलमध्ये जोडलेले द्रावण थोडे अधिक असू शकते, जे झिल्लीला DNA बांधण्यासाठी अधिक अनुकूल आहे, परंतु सामान्यतः 750ul पेक्षा जास्त नसते.

6. जेल रिकव्हरीची गुरुकिल्ली म्हणजे स्तंभातील मीठ एकाग्रता, आंबटपणा (चार्ज) आणि द्रावणाची हायड्रोफोबिसिटी द्वारे स्तंभाशी डीएनए बांधणे.म्हणून, इलेक्ट्रोफोरेसीस बफरचा pH खूप जास्त असल्यास, 10ul (pH 5.0, 3mol/L NaAC) सोलमध्ये जोडला जाऊ शकतो;पडद्यावरील डीएनए रेणू चांगल्या प्रकारे रोखण्यासाठी, गोंद विरघळल्यानंतर 30% आयसोप्रोपॅनॉल द्रवपदार्थ गरम करण्यासाठी जोडले जाऊ शकते.

7. एल्युएंट जोडण्यापूर्वी, इथेनॉल पूर्णपणे बाष्पीभवन करण्यासाठी काही मिनिटे (सुमारे 10 मिनिटे) खोलीच्या तपमानावर स्तंभ सोडा.

8. शेवटी, रिकव्हरी व्हॉल्यूम कमी करण्यासाठी कमी एल्युएंट जोडा.साधारणपणे, 30-50μl एल्युएंटचा वापर इल्युशनसाठी केला जातो (खूप कमी नाही, अन्यथा ते पडदा ओले करू शकणार नाही, जे उत्सर्जनासाठी अनुकूल नाही);उत्सर्जनाचे थेंब पडद्याच्या मध्यभागी असतात, ज्यामुळे पडद्याला बांधलेले डीएनए पूर्णपणे काढून टाकले जाते.

9. एल्युएंट जोडल्यानंतर, ते 55 अंशांच्या वॉटर बाथमध्ये 5 मिनिटांसाठी इल्युट केले जाऊ शकते किंवा 50 अंशांच्या वॉटर बाथमध्ये 10 मिनिटांपेक्षा जास्त काळ ठेवले जाऊ शकते किंवा रात्रभर 4 अंशांवर पॅराफिल्मने सीलबंद केले जाऊ शकते आणि नंतर दुसर्या दिवशी पुनर्प्राप्तीसाठी सेंट्रीफ्यूज केले जाऊ शकते, परिणाम चांगला होतो.

10.केंद्रित इल्युएट परत शोषण स्तंभात जोडा आणि पुन्हा सेंट्रीफ्यूज करा.

पीसीआर उत्पादन पुनर्प्राप्तीसाठी तपशीलवार पद्धती आणि प्रक्रिया

1. सामान्य रबर पुनर्वापर

आपण गोंद पुनर्प्राप्त करू इच्छित असल्यास, एक किट वापरणे चांगले आहे, जे सोयीस्कर आहे आणि पुनर्प्राप्ती दर किंचित जास्त आहे.जर तुम्हाला ते मॅन्युअली रिकव्हर करायचे असेल, तर तुम्ही गोंद कापल्यानंतर TE च्या 3 पट व्हॉल्यूम जोडू शकता.पाण्याच्या आंघोळीमध्ये वितळल्यानंतर, फिनॉल, फिनॉल/क्लोरोफॉर्म स्वच्छपणे काढले जातात आणि इथेनॉलचा अवक्षेप केला जातो.बस एवढेच.

2. कमी हळुवार बिंदू जेल पासून डीएनए पुनर्प्राप्ती

डीएनए तुकड्यांचे शुद्धीकरण TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) जेलच्या व्हॉल्यूमच्या बरोबरीने जोडा आणि जेल पूर्णपणे विरघळण्यासाठी 5 मिनिटे 65°C पाण्याच्या बाथमध्ये ठेवा.

खोलीच्या तपमानावर आणल्यानंतर, समान प्रमाणात फिनॉल (TE सह संपृक्त, TE वरच्या थरात बंद केले गेले आणि फिनॉलचा खालचा थर काढून टाकण्यात आला) जोडले गेले आणि मिश्रण हलक्या हाताने मिसळले गेले (मिश्रण आवश्यक नाही), आणि 12,000 rpm वर 3 मिनिटांसाठी सेंट्रीफ्यूज केले गेले.1-2 वेळा पुन्हा करा.

सुपरनॅटंट घ्या, इथेनॉल पर्जन्य पूर्ण करण्यासाठी 3mol/L सोडियम एसीटेट (pH 5.2) ची 0.1 मात्रा आणि परिपूर्ण इथेनॉलच्या 2.5 पट मात्रा घाला.शुद्ध डीएनए योग्य प्रमाणात TE सह विरघळवा, सामग्री मोजा आणि वापरासाठी तयार करा (त्याचा वापर लक्ष्य जनुक संरचना विश्लेषण, प्रोब तयार करणे इत्यादीसाठी केला जाऊ शकतो).

3. चांगल्या प्रवर्धन विशिष्टतेसह पीसीआर पुनर्प्राप्ती

जर पीसीआर प्रवर्धनाची विशिष्टता चांगली असेल, तर ते पीसीआर उत्पादनाचे एक साधे शुद्धीकरण आणि पुनर्प्राप्ती आहे.तुम्ही PCR उत्पादनात 50ug/ml प्रोटीनेज के जोडू शकता, 1h साठी 37 अंश, फिनॉल/क्लोरोफॉर्मसह एकदा काढू शकता, क्लोरोफॉर्मसह एकदा काढू शकता आणि सुपरनाटंटचा 0.1 खंड जोडू शकता.निरपेक्ष इथेनॉलच्या 2.5 खंडांसह पर्जन्यवृष्टीद्वारे सोडियम एसीटेट पुनर्प्राप्त केले गेले.

संबंधित उत्पादने:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/