अलीकडे, मला काहीतरी आश्चर्यकारक सापडले!त्याच्या सभोवतालच्या अनेक प्रगत प्रयोग व्यावसायिकांना काही अगदी मूलभूत प्रायोगिक ज्ञानाचे मुद्दे देखील माहित नाहीत.

उदाहरणार्थ, तुम्ही खालील प्रश्नांची उत्तरे देऊ शकता का?

OD260 आणि A260 मध्ये फरक आहे का?प्रत्येकाचा अर्थ काय?
OD हे ऑप्टिकल घनता (ऑप्टिकल घनता) चे संक्षेप आहे, A हे शोषक (शोषक) चे संक्षेप आहे, दोन संकल्पना प्रत्यक्षात समान आहेत, "ऑप्टिकल घनता" "शोषक" आहे, परंतु "ऑप्टिकल घनता" बहुतेक राष्ट्रीय मानकांशी सुसंगत आहे आणि अधिक प्रमाणित आहे.

न्यूक्लिक अॅसिड एकाग्रतेची गणना करण्यासाठी आम्ही सहसा OD मूल्य 260nm वर मोजतो, तर 1OD काय दर्शवते?
न्यूक्लिक अॅसिडचे जास्तीत जास्त शोषण शिखर 260nm च्या तरंगलांबीवर असते, ज्यामध्ये DNA आणि RNA दोन्ही असतात, तसेच विखंडित न्यूक्लिक अॅसिडचे तुकडे (हा मुख्य मुद्दा आहे).
260 nm च्या तरंगलांबीवर मोजलेले OD मूल्य OD260 म्हणून नोंदवले गेले.नमुना शुद्ध असल्यास, OD260 मूल्य न्यूक्लिक अॅसिड नमुन्याच्या एकाग्रतेची गणना करू शकते.
1 OD260 = 50 μg/ml dsDNA (डबल-स्ट्रँडेड DNA)
=37 μg/ml ssDNA (सिंगल-स्ट्रँडेड DNA)
=40 μg/ml RNA
=30 μg/ml dNTPs (ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स)
RT-PCR, Realtime-PCR आणि QPCR मध्ये काही संबंध आणि फरक आहे का?
रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन पीसीआरसाठी आरटी-पीसीआर लहान आहे
रिअल टाइम पीसीआर = qPCR, परिमाणवाचक रिअल टाइम पीसीआरसाठी लहान
जरी रिअल टाइम पीसीआर (रिअल-टाइम फ्लोरोसेंट क्वांटिटेटिव्ह पीसीआर) आणि रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन पीसीआर (रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन पीसीआर) हे दोन्ही आरटी-पीसीआर म्हणून संक्षिप्त असल्याचे दिसते.पण आंतरराष्ट्रीय अधिवेशन आहे: RT-PCR विशेषत: रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन PCR चा संदर्भ देते.

जीवशास्त्रातील DNA/RNA च्या लांबीचे वर्णन करण्यासाठी सामान्यतः वापरले जाणारे nt, bp आणि kb काय आहेत?
nt = न्यूक्लियोटाइड
bp = बेस पेअर बेस पेअर
kb = किलोबेस

अर्थात, तुम्ही म्हणाल की अनेकांना या छोट्या तपशीलांची पर्वा नाही!प्रत्येकजण हे करतो आणि ते काय आहे हे कोणीही तुम्हाला विचारणार नाही.तुम्हाला माहित आहे की हे अनावश्यक आहे, बरोबर?

नाही, नाही, नाही, हे जाणून घेणे खूप आवश्यक आहे!ज्याच्यामुळे?
कारण तुम्हाला लेख पोस्ट करायचा आहे!भाऊ!तुम्‍ही ग्रॅज्युएशनचे लक्ष्‍य ठेवत असाल किंवा वैज्ञानिक संशोधन यश मिळवत असाल, तुम्‍ही बोलण्‍यासाठी लेखांवर अवलंबून असले पाहिजे!

न्यूक्लिक अॅसिड काढणे हा सर्वात सोपा आणि मूलभूत प्रयोग असावा.न्यूक्लिक अॅसिड निष्कर्षणाची गुणवत्ता त्यानंतरच्या प्रयोगांचे परिणाम थेट ठरवते.

मी हे अनेकवेळा सांगितले असले तरी अजूनही बरेच मित्र आहेत ज्यांना त्याची पर्वा नाही.यावेळी मी लेखातून बाहेर पडण्याचा निर्णय घेतला!

MIQE म्हणून संदर्भित परिमाणवाचक रिअल-टाइम पीसीआर प्रयोगांच्या प्रकाशनासाठी किमान माहिती, आंतरराष्ट्रीय स्तरावर लाँच केलेल्या फ्लोरोसेन्स परिमाणात्मक प्रयोग मार्गदर्शक तत्त्वांचा एक संच आहे, जो फ्लोरोसेन्स परिमाणात्मक PCR प्रयोगांचे मूल्यांकन आणि लेख प्रकाशित करण्यासाठी आवश्यक प्रायोगिक माहितीसाठी किमान मानके प्रस्तावित करतो.प्रयोगकर्त्याने प्रदान केलेल्या प्रायोगिक परिस्थिती आणि विश्लेषण पद्धतींद्वारे, समीक्षक संशोधकाच्या प्रायोगिक योजनेच्या वैधतेचे अधिक चांगले मूल्यांकन करू शकतात.

हे पाहिले जाऊ शकते की न्यूक्लिक अॅसिड काढण्याच्या विभागात, खालील शोध आयटम प्रस्तावित केले आहेत,

"E" प्रदान करणे आवश्यक असलेली माहिती सूचित करते आणि "D" आवश्यक असल्यास प्रदान केलेली माहिती सूचित करते.

फॉर्म खूप क्लिष्ट आहे, खरं तर, मला असे म्हणायचे आहे की प्रत्येकाने सुरुवात करणे आवश्यक आहे

शुद्धता (D), उत्पन्न (D), अखंडता (E) आणि सातत्य (E) या चार पैलूंमध्ये न्यूक्लिक अॅसिडचे मूल्यांकन करण्यासाठी.

प्रायोगिक सवयींनुसार, प्रथम शुद्धता आणि एकाग्रतेच्या मूल्यांकन पद्धतींबद्दल बोला.

OD मापन ही प्रयोगकर्त्यांसाठी सर्वात आवडती आणि सर्वात सोपी शोध पद्धत आहे.तत्त्वाबद्दल, मी येथे तपशीलात जाणार नाही.न्यूक्लिक अॅसिड नमुन्यांचे थेट परिमाणात्मक विश्लेषण करण्यासाठी अनेक प्रयोगशाळा आता अल्ट्रा-मायक्रो स्पेक्ट्रोफोटोमीटर वापरतात.शोषक मूल्य प्रदर्शित करताना, प्रोग्राम थेट एकाग्रता मूल्य (न्यूक्लिक अॅसिड, प्रोटीन आणि फ्लोरोसेंट डाई) आणि संबंधित गुणोत्तर देतो.OD मूल्याच्या विश्लेषणासाठी, हे चित्र जतन करा आणि तुम्ही ठीक व्हाल.

युनिव्हर्सल OD मूल्य समाधान सूची

तथापि, काही चेतावणी आहेत ज्या आपल्यासाठी स्वतंत्रपणे आणणे आवश्यक आहे.

(शेवटी, मला माहित आहे की आपण तेच असाल जे बचत करतात आणि आपल्याला त्यांची आवश्यकता होईपर्यंत प्रतीक्षा करतात!)

टीप 1 उपकरणे

OD मूल्य वेगवेगळ्या उपकरणांमुळे प्रभावित होईल.जोपर्यंत OD260 एका विशिष्ट श्रेणीमध्ये आहे, तोपर्यंत OD230 आणि OD280 ची मूल्ये अर्थपूर्ण आहेत.उदाहरणार्थ, 260nm वर सामान्य Eppendorf D30 चे शोषक श्रेणी 0~3A आहे आणि थर्मोचा नॅनोड्रॉप वन 260nm आहे.शोषक श्रेणी 0.5~62.5A.

टीप 2सौम्य अभिकर्मक

OD मूल्य वेगवेगळ्या अभिकर्मकांच्या सौम्यतेमुळे प्रभावित होऊ शकते.उदाहरणार्थ, pH मध्ये शुद्ध RNA चे OD260/280 वाचन7.5 10 मिमी ट्रिसबफर 1.9-2.1 दरम्यान आहे, तर मध्येतटस्थ जलीय द्रावणगुणोत्तर कमी असेल, कदाचित फक्त 1.8-2.0, परंतु याचा अर्थ असा नाही की आरएनएच्या गुणवत्तेत फरक पडतो.

टीप 3अवशिष्ट पदार्थ

अवशिष्ट पदार्थांच्या अस्तित्वामुळे न्यूक्लिक अॅसिड एकाग्रता मापनाच्या अचूकतेवर परिणाम होईल, म्हणून न्यूक्लिक अॅसिडच्या नमुन्यांमधील प्रथिने, फिनॉल, पॉलिसेकेराइड आणि पॉलीफेनॉलचे अवशेष शक्य तितके टाळणे आवश्यक आहे.

तथापि, खरं तर, सेंद्रिय अभिकर्मकांसह निष्कर्षण ही जुनी पद्धत आहे.व्यावसायिक किटमध्ये, निष्कर्षण प्रभाव सेंट्रीफ्यूगेशनसह एकत्रित केलेल्या सिलिका-आधारित शोषण स्तंभाद्वारे प्राप्त केला जाऊ शकतो, काढून टाकणे कठीण असलेल्या विषारी आणि हानिकारक सेंद्रिय अभिकर्मकांना टाळता येते. समस्या, जसे कीफोरजीनचे न्यूक्लिक अॅसिड एक्स्ट्रॅक्शन किट, संपूर्ण ऑपरेशनमध्ये DNase/RNase आणि विषारी सेंद्रिय अभिकर्मक वापरत नाही, जलद आणि सुरक्षित, आणि तेप्रभाव आहेचांगले(चुकून टक्कल पडल्याचे सांगितले, पण मला माहित आहे की तुम्हाला जाणून घ्यायचे आहे).

उदाहरण 1: जीनोमिक डीएनए निष्कर्षण उत्पन्न आणि शुद्धता

फोरजीन सॉईल डीएनए आयसोलेशन किट (DE-05511) विविध स्त्रोतांकडून मातीचे नमुने हाताळते आणि जीनोमिक डीएनएचे प्रमाण आणि शुद्धता खालील तक्त्यामध्ये दर्शविली आहे:
उदाहरण 2: टिश्यू आरएनए निष्कर्षण उत्पन्न आणि शुद्धता

अ‍ॅनिमल टोटल आरएनए आयसोलेशन किट (RE-03012) ने विविध ऊतींचे नमुने प्रक्रिया केली आणि आरएनएचे प्रमाण आणि शुद्धता खालील तक्त्यामध्ये दर्शविली आहे (माऊस टिश्यूसाठी):
तथापि, आपण OD मूल्य पूर्ण केले आहे असे समजू नका.मी समोर तुमच्यासाठी काढलेल्या मुख्य मुद्यांची तुम्ही काळजी घेत आहात का?

लक्ष द्या

खंडित न्यूक्लिक अॅसिड रेणू देखील शोषक मध्ये मोजले जातील.तुमच्याकडे आरएनएमध्ये जीनोमिक डीएनए अवशेष आहेत असे गृहीत धरल्यास, तुमचे ओडी मूल्य खूप जास्त असल्याचे दिसून येईल, परंतु आरएनएची वास्तविक एकाग्रता निश्चित केली जाऊ शकत नाही.तुमचा RNA आहे की नाही हे स्पष्ट नाही आहे की ऱ्हास आहे की नाही, त्यामुळे अधिक अचूक निर्णय देण्यासाठी आम्हाला अजूनही सर्वसमावेशक मूल्यमापन पद्धतीची आवश्यकता आहे, म्हणजेच MIQE मध्ये नमूद केलेल्या न्यूक्लिक अॅसिड अखंडतेचे मूल्यांकन.