Ⅰ. प्रतिक्रिया प्रणालीची संवेदनशीलता वाढवा:

1. उच्च दर्जाचे RNA वेगळे करा:

यशस्वी cDNA संश्लेषण उच्च-गुणवत्तेच्या RNA पासून येते.उच्च-गुणवत्तेच्या RNA ने कमीत कमी एकूण लांबीची खात्री केली पाहिजे आणि त्यात EDTA किंवा SDS सारखे रेकॉर्डिंग एंजाइम नसलेले अवरोधक नसावेत.RNA ची गुणवत्ता आपण cDNA मध्ये लिप्यंतरण करू शकता त्या अनुक्रम माहितीचे कमाल मूल्य निर्धारित करते.सामान्य आरएनए शुद्धीकरण पद्धत ही आयसोसायनेट/अॅसिडोफेनॉल वापरण्याची एक पायरी पद्धत आहे.RNase चे प्रदूषण रोखण्यासाठी, RNase (जसे की स्वादुपिंड) समृद्ध नमुन्यापासून वेगळे केलेल्या RNA ला उच्च-गुणवत्तेचा RNA वाचवण्यासाठी फॉर्मल्डिहाइड साठवणे आवश्यक आहे, जे दीर्घकालीन स्टोरेजसाठी अधिक आहे.उंदराच्या यकृतापासून काढलेला आरएनए मुळात पाण्यात एक आठवडा साठवल्यानंतर खराब झाला होता, तर उंदराच्या प्लीहामधून काढलेला आरएनए पाण्यात तीन वर्षांच्या साठवणीनंतर स्थिर राहिला.याव्यतिरिक्त, 4kb पेक्षा मोठ्या ट्रान्स्क्रिप्ट लहान प्रतिलेखांपेक्षा RNase डिग्रेडेशन ट्रेस करण्यासाठी अधिक संवेदनशील असतात.स्टोरेज RNA नमुन्याची स्थिरता वाढवण्यासाठी, RNA आयनच्या मेथालमामाइनमध्ये विरघळली जाऊ शकते आणि -70 °C मध्ये साठवली जाते.RNA वाचवण्यासाठी वापरल्या जाणार्‍या थायलाइडमध्ये RNA खराब करणारी विविध वस्तू नसावीत.स्वादुपिंडापासून मिळणारा आरएनए, मेथॅलमामाइनमध्ये किमान एक वर्षासाठी जतन केला जाऊ शकतो.जेव्हा तुम्ही RNA वापरण्यासाठी तयार असाल, तेव्हा तुम्ही RNA चा अवक्षेप करण्यासाठी खालील पद्धती वापरू शकता: NaCl 0.2m आणि इथेनॉलच्या 4 पट जोडा, खोलीचे तापमान 3-5 मिनिटे ठेवा आणि 5 मिनिटांसाठी 10,000 × g केंद्रापसारक ठेवा.

2. RNaseH क्रियाकलाप (RNaseH-) शिवाय रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस वापरा:

सीडीएनए संश्लेषणाची लांबी आणि उत्पन्न वाढवण्यासाठी रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन रिअॅक्शनमध्ये RNase इनहिबिटर सहसा जोडले जातात.RNase इनहिबिटर पहिल्या साखळी संश्लेषण प्रतिक्रियेमध्ये DTT सारख्या बफर आणि कमी करणाऱ्या एजंटच्या उपस्थितीत जोडला जातो कारण प्री-cDNA संश्लेषण प्रक्रिया इनहिबिटरला विकृत करते, ज्यामुळे RNA खराब करणारे बंधनकारक RNases सोडतात.प्रोटीन RNase इनहिबिटर केवळ RNase A, B, C द्वारे RNA च्या ऱ्हासास प्रतिबंधित करते आणि त्वचेवर RNase प्रतिबंधित करत नाही, त्यामुळे या अवरोधकांचा वापर करूनही बोटांमधून RNase येऊ नयेत याची काळजी घेतली पाहिजे.

रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस RNA चे cDNA मध्ये रूपांतर उत्प्रेरित करते.M-MLV आणि AMV या दोन्हींमध्ये त्यांच्या स्वतःच्या पॉलिमरेज क्रियाकलापाव्यतिरिक्त अंतर्जात RNaseH क्रियाकलाप आहेत.RNaseH क्रियाकलाप RNA टेम्पलेट्स आणि DNA प्राइमर्स किंवा cDNA विस्तार स्ट्रँड्समध्ये तयार झालेल्या विषम स्ट्रँडसाठी पॉलिमरेझ क्रियाकलापांशी स्पर्धा करते आणि RNA: RNA स्ट्रँड्स DNA कॉम्प्लेक्समध्ये खराब करते.RNaseH क्रियाकलापाने खराब झालेले RNA टेम्पलेट यापुढे cDNA संश्लेषणासाठी प्रभावी सब्सट्रेट्स म्हणून वापरले जाऊ शकत नाहीत, ज्यामुळे cDNA संश्लेषणाचे उत्पन्न आणि लांबी कमी होते.अशा प्रकारे रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेसची RNaseH क्रियाकलाप काढून टाकणे किंवा मोठ्या प्रमाणात कमी करणे खूप फायदेशीर ठरेल.

सुपरस्क्रिप्टⅡ रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस, RNaseH चे MMLV रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस- आणि थर्मोस्क्रिप्ट रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस, RNaseH चे AMV- MMLV आणि AMV पेक्षा अधिक पूर्ण-लांबीचे cDNA मिळाले.RT-PCR संवेदनशीलता cDNA संश्लेषित केलेल्या प्रमाणामुळे प्रभावित होते.थर्मोस्क्रिप्ट AMV पेक्षा जास्त संवेदनशील आहे.आरटी-पीसीआर उत्पादनांचा आकार सीडीएनएचे संश्लेषण करण्यासाठी रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेसच्या क्षमतेद्वारे मर्यादित आहे, विशेषत: मोठ्या सीडीएनएचे क्लोनिंग करताना.MMLV च्या तुलनेत, SuperScripⅡ ने लांब RT-PCR उत्पादनांच्या उत्पन्नात लक्षणीय वाढ केली आहे.RNaseH- चे रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस देखील थर्मल स्थिरता वाढवते, त्यामुळे प्रतिक्रिया सामान्य 37-42℃ पेक्षा जास्त तापमानात केली जाऊ शकते.सुचविलेल्या संश्लेषण परिस्थितीत, oligo(dT) प्राइमर्स आणि 10μCi [alpha-p]dCTP वापरले गेले.पहिल्या साखळीचे एकूण उत्पादन TCA पर्जन्य पद्धती वापरून मोजले गेले.पूर्ण-लांबीच्या सीडीएनएचे विश्लेषण आकार-क्रमित पट्टी काढून टाकणे आणि अल्कधर्मी ऍग्रोज जेलमध्ये मोजणे वापरून केले गेले.

3. रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शनचे उष्णता संरक्षण तापमान वाढवा:

उच्च धारण तापमान RNA ची दुय्यम रचना उघडण्यास आणि प्रतिक्रियेचे उत्पन्न वाढविण्यास मदत करते.बर्‍याच RNA टेम्पलेट्ससाठी, RNA आणि प्राइमरला बफर किंवा मीठाशिवाय 65°C वर धरून ठेवल्याने आणि नंतर त्यांना बर्फावर त्वरीत थंड केल्याने बहुतेक दुय्यम संरचना काढून टाकल्या जातात आणि प्राइमर्स बांधता येतात.तथापि, थर्मल विकृतीकरणानंतरही, काही टेम्पलेट्समध्ये दुय्यम संरचना आहे.थर्मोस्क्रिप्ट रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस वापरून आणि प्रवर्धन सुधारण्यासाठी रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस रिअॅक्शन उच्च तापमानात ठेवून या कठीण टेम्पलेट्सचे प्रवर्धन केले जाऊ शकते.उच्च होल्डिंग तापमान देखील विशिष्टता वाढवू शकते, विशेषत: जेव्हा सीडीएनए संश्लेषण जनुक-विशिष्ट प्राइमर्स (GSPS) वापरून केले जाते (धडा 3 पहा).GSP वापरत असल्यास, प्राइमरचे Tm मूल्य अपेक्षित धरून ठेवलेल्या तापमानाप्रमाणेच असल्याची खात्री करा.60℃ वरील oligo(dT) आणि यादृच्छिक प्राइमर्स वापरू नका.यादृच्छिक प्राइमर्स 60℃ पर्यंत वाढण्यापूर्वी 10 मिनिटांसाठी 25℃ वर ठेवण्याची आवश्यकता आहे.उच्च रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन तापमान वापरण्याव्यतिरिक्त, RNA/ प्राइमर मिश्रण थेट 65℃ कमी करणाऱ्या तापमानापासून रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन होल्डिंग तापमानात स्थानांतरित करून आणि प्रीहेटेड 2× प्रतिक्रिया मिश्रण (cDNA थर्मल इनिशिएशन सिंथेसिस) जोडून विशिष्टता सुधारली जाऊ शकते.हा दृष्टीकोन कमी तापमानात होणार्‍या इंटरमॉलिक्युलर बेस पेअरिंगला प्रतिबंध करण्यास मदत करतो.पीसीआर इन्स्ट्रुमेंट वापरणे RT-PCR साठी आवश्यक असलेले अनेक तापमान स्विच सुलभ करते.

Tth हीट स्टॅबिलाइज्ड पॉलिमरेझ Mg2+ च्या उपस्थितीत DNA पॉलिमरेझ आणि Mn2+ च्या उपस्थितीत RNA पॉलिमरेझ म्हणून कार्य करते.ते 65 डिग्री सेल्सियस पर्यंत उष्णता ठेवू शकते.तथापि, PCR दरम्यान Mn2+ ची उपस्थिती निष्ठा कमी करते, ज्यामुळे उच्च परिशुद्धता प्रवर्धन, जसे की cDNA क्लोनिंगसाठी Tth पॉलिमरेझ कमी योग्य बनते.याव्यतिरिक्त, रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शनमध्ये Tth कमी कार्यक्षम आहे, ज्यामुळे संवेदनशीलता कमी होते, आणि एकच एन्झाइम रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन आणि PCR करू शकतो, रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शनशिवाय नियंत्रण प्रतिक्रियांचा वापर दूषित जीनोमिक डीएनएच्या सीडीएनएच्या वाढीव उत्पादनांमध्ये फरक करण्यासाठी केला जाऊ शकत नाही.

4. रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शनला प्रोत्साहन देणारे अॅडिटीव्ह:

पहिल्या साखळी संश्लेषण प्रतिक्रियेमध्ये ग्लिसरीन आणि डीएमएसओसह मिश्रित पदार्थ जोडल्याने न्यूक्लिक अॅसिड दुहेरी स्ट्रँडची स्थिरता कमी होऊ शकते आणि आरएनए दुय्यम संरचनेत अडथळा येऊ शकतो.SuperScriptⅡ किंवा MMLV च्या क्रियाकलापांना प्रभावित न करता 20% पर्यंत ग्लिसरीन किंवा 10% DMSO जोडले जाऊ शकते.एएमव्ही 20% पर्यंत ग्लिसरॉल देखील सहन करू शकते क्रियाकलाप कमी न करता.सुपरस्क्रिप्टⅡ रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन रिअॅक्शनमध्ये RT-PCR ची संवेदनशीलता वाढवण्यासाठी, 10% ग्लिसरॉल जोडले जाऊ शकते आणि 45℃ वर इन्सुलेशन केले जाऊ शकते.जर रेट्रोट्रांस्क्रिप्शन-रिअॅक्शन उत्पादनाचा 1/10 पीसीआरमध्ये जोडला गेला असेल, तर अॅम्प्लीफिकेशन रिअॅक्शनमध्ये ग्लिसरॉलची एकाग्रता 0.4% आहे, जी पीसीआरला रोखण्यासाठी पुरेसे नाही.

5. RNaseH प्रक्रिया:

PCR पूर्वी RNaseH सह cDNA संश्लेषण प्रतिक्रियांचे उपचार करून संवेदनशीलता सुधारली जाऊ शकते.काही टेम्प्लेट्ससाठी, असे मानले जाते की सीडीएनए संश्लेषण प्रतिक्रियेतील आरएनए वाढीव उत्पादनांचे बंधन प्रतिबंधित करते, अशा परिस्थितीत RNaseH उपचार संवेदनशीलता वाढवू शकतात.सामान्यतः, तुलनेने लांब पूर्ण-लांबीच्या cDNA लक्ष्य टेम्पलेटच्या विस्तारासाठी RNaseH उपचार आवश्यक असतात, जसे की कमी प्रत असलेले ट्यूबरस स्कॅरोसिसⅡ.या कठीण टेम्प्लेटसाठी, RNaseH ने सुपरस्क्रिप्टⅡ किंवा AMV द्वारे संश्लेषित केलेल्या cDNA द्वारे व्युत्पन्न केलेले सिग्नल वाढवले.बर्‍याच RT-PCR प्रतिक्रियांसाठी, RNaseH उपचार पर्यायी आहे कारण 95℃ इन्सुलेटेड PCR विकृतीकरण चरण विशेषत: RNA: DNA कॉम्प्लेक्समधून RNA चे हायड्रोलायझेशन करते.

6. आरएनएचे कमी प्रमाण शोधण्याच्या सुधारित पद्धती:

आरटी-पीसीआर विशेषतः आव्हानात्मक असते जेव्हा फक्त थोड्या प्रमाणात आरएनए उपलब्ध असते.RNA पृथक्करणादरम्यान वाहक म्हणून ग्लायकोजेन जोडल्याने लहान नमुन्यांचे उत्पन्न वाढण्यास मदत होते.ट्रायझोल प्रमाणेच RNase-मुक्त ग्लायकोजेन जोडले जाऊ शकते.ग्लायकोजेन पाण्यात विरघळणारे आहे आणि त्यानंतरच्या पर्जन्यवृष्टीत मदत करण्यासाठी आरएनए सह पाण्याच्या टप्प्यात राहू शकते.RNase-मुक्त ग्लायकोजेनची शिफारस केलेली एकाग्रता 50mg पेक्षा कमी ऊती किंवा 106 संवर्धित पेशींसाठी 250μg/ml आहे.

सुपरस्क्रिप्टⅡ वापरून ट्रान्सक्रिप्शन रिअ‍ॅक्शन्स रिव्हर्स करण्यासाठी एसिटाइलेटेड BSA जोडल्याने संवेदनशीलता वाढू शकते आणि थोड्या प्रमाणात RNA साठी, SuperScriptⅡ चे प्रमाण कमी करून आणि RnaseOut न्यूक्लीज इनहिबिटरची 40 युनिट्स जोडल्याने शोध पातळी सुधारू शकते.जर ग्लायकोजेन RNA पृथक्करणामध्ये वापरला गेला असेल तर, SuperScriptⅡ वापरून ट्रान्सक्रिप्शन रिव्हर्स करण्यासाठी BSA किंवा RNase इनहिबिटर जोडण्याची शिफारस केली जाते.

Ⅱ. RT-PCR ची विशिष्टता वाढवा

1. cNDA संश्लेषण:

प्रथम स्ट्रँड सीडीएनए संश्लेषण सुरू करण्यासाठी तीन वेगवेगळ्या पद्धती वापरल्या जाऊ शकतात आणि प्रत्येक पद्धतीची सापेक्ष विशिष्टता संश्लेषित सीडीएनएचे प्रमाण आणि प्रकार प्रभावित करते.

यादृच्छिक प्राइमर पद्धत ही तीन पद्धतींपैकी सर्वात कमी विशिष्ट आहे.लहान, आंशिक लांबीचे cDNA तयार करण्यासाठी संपूर्ण उतार्‍यावर अनेक ठिकाणी प्राइमर्स अॅनिल केले जातात.ही पद्धत सहसा 5′ टर्मिनल सीक्वेन्स आणि सीडीएनए आरएनए टेम्प्लेटमधून दुय्यम स्ट्रक्चरल क्षेत्रांसह किंवा रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेसची प्रतिकृती तयार करू शकत नाही अशा टर्मिनेटिंग साइटसह प्राप्त करण्यासाठी वापरली जाते.सर्वात लांब सीडीएनए मिळविण्यासाठी, प्रत्येक आरएनए नमुन्यातील प्राइमर्सचे आरएनए आणि प्राइमरीचे गुणोत्तर प्रायोगिकरित्या निर्धारित करणे आवश्यक आहे.यादृच्छिक प्राइमर्सची प्रारंभिक एकाग्रता 50 ते 250ng प्रति 20μl प्रतिक्रिया प्रणालीमध्ये असते.यादृच्छिक प्राइमर्सचा वापर करून एकूण RNA मधून संश्लेषित केलेले cDNA हे प्रामुख्याने ribosomal RNA असल्यामुळे, poly(A)+RNA हे सामान्यतः टेम्पलेट म्हणून निवडले जाते.

ऑलिगो(डीटी) दीक्षा यादृच्छिक प्राइमर्सपेक्षा अधिक विशिष्ट आहे.बहुतेक युकेरियोटिक पेशींमध्ये mRNA च्या 3′ शेवटी आढळणाऱ्या पॉली(A) शेपटीने ते संकरित होते.पॉली(A)+RNA एकूण RNA च्या अंदाजे 1% ते 2% असल्यामुळे, cDNA ची मात्रा आणि जटिलता यादृच्छिक प्राइमर वापरल्या गेल्यापेक्षा खूपच कमी आहे.त्याच्या उच्च विशिष्टतेमुळे, oligo(dT) ला सामान्यतः RNA ते प्राइमर गुणोत्तर आणि पॉली(A)+ निवडीसाठी ऑप्टिमायझेशनची आवश्यकता नसते.प्रति 20μl प्रतिक्रिया प्रणाली 0.5μg oligo(dT) वापरण्याची शिफारस केली जाते.oligo(dT)12-18 बहुतेक RT-PCR साठी योग्य आहे.ThermoScript RT-PCR प्रणाली उत्तम थर्मल स्थिरतेमुळे oligo(dT)20 प्रदान करते आणि उच्च धारण तापमानासाठी योग्य आहे.

रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन स्टेपसाठी जीन-स्पेसिफिक प्राइमर्स (GSP) सर्वोत्तम विशिष्ट प्राइमर्स आहेत.जीएसपी हे अँटीसेन्स ऑलिगोन्यूक्लिओसाइड आहे जे यादृच्छिक प्राइमर्स किंवा ऑलिगो(डीटी) सारख्या सर्व आरएनए एनल करण्याऐवजी विशेषतः आरएनए गंतव्य अनुक्रमांसह संकरित करू शकते.PCR प्राइमर डिझाइन करण्यासाठी वापरलेले नियम रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन रिअॅक्शन GSP च्या डिझाइनवर देखील लागू होतात.GSP हा mRNA3′ च्या शेवटी अॅम्प्लिफिकेशन प्राइमर अॅनिल केलेला समान क्रम असू शकतो किंवा GSP ची रचना रिव्हर्स अॅम्प्लिफिकेशन प्राइमरसह डाउनस्ट्रीम अॅनिल करण्यासाठी केली जाऊ शकते.काही प्रवर्धित वस्तूंसाठी, यशस्वी RT-PCR साठी एकापेक्षा जास्त अँटिसेन्स प्राइमर डिझाइन करणे आवश्यक आहे कारण लक्ष्य RNA ची दुय्यम रचना प्राइमरला बंधनकारक होण्यापासून रोखू शकते.20μl च्या पहिल्या साखळी संश्लेषण प्रतिक्रिया प्रणालीमध्ये 1pmol antisense GSP वापरण्याची सूचना केली आहे.

2. रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शनचे उष्णता संरक्षण तापमान वाढवा:

GSP विशिष्टतेचा पूर्ण लाभ घेण्यासाठी, उच्च थर्मल स्थिरतेसह रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस वापरावे.प्रतिक्रिया कठोरता वाढवण्यासाठी उष्णता-स्थिर रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस उच्च तापमानात इन्सुलेट केले जाऊ शकते.उदाहरणार्थ, जर GSP 55°C वर ऍनिल केले असेल, तर AMV किंवा M-MLV वापरून कमी कडकपणासह रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन 37°C वर केले असल्यास GSP ची विशिष्टता पूर्णपणे वापरली जात नाही.तथापि, SuperScripⅡ आणि ThermoScript 50℃ किंवा त्याहून अधिक तापमानावर प्रतिक्रिया देऊ शकतात, ज्यामुळे कमी तापमानात उत्पादित होणारी विशिष्ट नसलेली उत्पादने काढून टाकली जातात.जास्तीत जास्त विशिष्टतेसाठी, RNA/ प्राइमर मिश्रण प्रीहिटेड 2 x प्रतिक्रिया मिश्रण (cDNA संश्लेषणाची थर्मल इनिशिएशन) जोडून थेट 65℃ विकृतीकरण तापमानापासून रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन होल्डिंग तापमानात हस्तांतरित केले जाऊ शकते.हे कमी तापमानात रेणूंमध्ये बेस जोडण्यापासून रोखण्यास मदत करते.PCR साधन वापरल्याने RT-PCR साठी आवश्यक असलेली अनेक तापमान संक्रमणे सुलभ होतात.

3. जीनोमिक डीएनए दूषितता कमी करा:

RT-PCR मधील एक संभाव्य अडचण म्हणजे आरएनए जीनोमिक डीएनए दूषित करते.Trizol Reagent सारख्या चांगल्या RNA पृथक्करण पद्धतींचा वापर RNA तयारीमध्ये जीनोमिक DNA दूषितता कमी करतो.जीनोमिक डीएनएपासून उत्पादित उत्पादने टाळण्यासाठी, रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शनपूर्वी दूषित डीएनए काढून टाकण्यासाठी आरएनएचा प्रवर्धन ग्रेड DnasⅠ सह उपचार केला जाऊ शकतो.DNaseⅠ पचन समाप्त करण्यासाठी नमुने 10 मिनिटांसाठी 2.0mM EDTA मध्ये 65℃ वर ठेवण्यात आले होते.उच्च तापमानात मॅग्नेशियम आयनवर अवलंबून असलेल्या आरएनए हायड्रोलिसिसला प्रतिबंध करण्यासाठी EDTA मॅग्नेशियम आयन चेलेट करते.

जीनोम डीएनए एम्प्लिफिकेशन उत्पादनापासून अॅम्प्लीफाइड सीडीएनए वेगळे करण्यासाठी, विभक्त एक्सॉनसह स्वतंत्रपणे अॅनिल करणारे प्राइमर्स डिझाइन केले जाऊ शकतात.cDNA मधून मिळवलेली PCR उत्पादने दूषित जीनोमिक DNA मधून मिळवलेली उत्पादने कमी असतील.दिलेला तुकडा जीनोमिक डीएनए किंवा सीडीएनएचा आहे की नाही हे निर्धारित करण्यासाठी प्रत्येक आरएनए टेम्पलेटवर रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शनशिवाय नियंत्रित प्रयोग देखील केला जातो.रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शनच्या अनुपस्थितीत मिळवलेली पीसीआर उत्पादने जीनोममधून घेतली जातात.

संबंधित उत्पादन

RT-PCR सोपे^ᵀᴹमी (एक पाऊल)

-वन-स्टेप किट रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन आणि पीसीआर एकाच ट्यूबमध्ये चालविण्यास सक्षम करते.त्यासाठी फक्त टेम्पलेट RNA, विशिष्ट PCR प्राइमर्स आणि RNase-फ्री ddH जोडणे आवश्यक आहे₂O.

-आरएनएचे रिअल-टाइम परिमाणात्मक विश्लेषण जलद आणि अचूकपणे केले जाऊ शकते.

-किटमध्ये एक अद्वितीय फोरजीन रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन अभिकर्मक आणि फोरजीन हॉटस्टार टाक डीएनए पॉलिमरेझचा वापर केला जातो आणि प्रतिक्रियेची प्रवर्धन कार्यक्षमता आणि विशिष्टता प्रभावीपणे सुधारण्यासाठी अद्वितीय प्रतिक्रिया प्रणालीसह एकत्रित केली जाते.

-ऑप्टिमाइज्ड रिअॅक्शन सिस्टीममुळे प्रतिक्रियेला उच्च शोध संवेदनशीलता, मजबूत थर्मल स्थिरता आणि चांगली सहनशीलता असते.

RT Easy II (GDNase सह) GDNase सह रिअल टाइम पीसीआरसाठी फर्स्ट-स्ट्रँड सीडीएनए संश्लेषणासाठी मास्टर प्रीमिक्स

-जीडीएनए काढण्याची कार्यक्षम क्षमता, जी 2 मिनिटांत टेम्पलेटमधील जीडीएनए काढू शकते.

-कार्यक्षम रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन सिस्टम, पहिल्या स्ट्रँड सीडीएनएचे संश्लेषण पूर्ण करण्यासाठी केवळ 15 मिनिटे लागतात.

-जटिल टेम्पलेट्स: उच्च GC सामग्री आणि जटिल दुय्यम रचना असलेले टेम्पलेट्स देखील उच्च कार्यक्षमतेसह उलट केले जाऊ शकतात.

-उच्च-संवेदनशीलता रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन सिस्टम, pg-स्तरीय टेम्पलेट्स देखील उच्च-गुणवत्तेचे cDNA मिळवू शकतात.

-रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन सिस्टीममध्ये उच्च थर्मल स्थिरता आहे, इष्टतम प्रतिक्रिया तापमान 42℃ आहे आणि तरीही 50℃ वर रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन कामगिरी चांगली आहे.