पीसीआर, एकाधिक पीसीआर, पीसीआर मध्ये, पीसीआर उलट करा, RT-PCR, qPCR (1)-पीसीआर

आम्ही विविध पीसीआरच्या संकल्पना, पायऱ्या आणि तपशीलांची क्रमवारी लावू

Ⅰ. पीसीआर

पॉलिमरेझ चेन रिअॅक्शन, ज्याला पीसीआर म्हणून संबोधले जाते, हे एक आण्विक जैविक तंत्रज्ञान आहे जे विशिष्ट डीएनए तुकड्यांना मोठे करण्यासाठी वापरले जाते.हे विट्रोमधील विशेष डीएनए प्रतिकृती म्हणून ओळखले जाऊ शकते.डीएनए पॉलिमरेझ (डीएनए पॉलिमरेझ I) 1955 च्या सुरुवातीस शोधला गेला आणि प्रायोगिक मूल्य आणि व्यावहारिकता असलेल्या ई. कोलीचा क्लेनो फ्रॅगमेंट 1970 च्या दशकाच्या सुरुवातीस डॉ. एच. क्लेनॉ यांनी शोधला, परंतु हे एन्झाइम तापमान सहन करत नसल्यामुळे, उच्च तापमान ते डीजनरेट करू शकत नाही, त्यामुळे पॉलिमरेजच्या उच्च तापमानाची प्रतिक्रिया कमी होते.आज वापरात असलेले एन्झाईम (ज्याला Taq पॉलिमरेझ म्हणतात), 1976 मध्ये थर्मस अॅक्वाटिकस या गरम पाण्याच्या झऱ्यातील जीवाणूपासून वेगळे करण्यात आले होते. त्याचे वैशिष्ट्य म्हणजे ते उच्च तापमानाला प्रतिकार करू शकते आणि एक आदर्श एंझाइम आहे, परंतु 1980 नंतर ते मोठ्या प्रमाणावर वापरले जाते.पीसीआरच्या मूळ आदिम प्रोटोटाइपची मूळ संकल्पना जीन दुरुस्ती आणि कॉपी करण्यासारखीच आहे, जी डॉ. केजेल क्लेपे यांनी 1971 मध्ये मांडली होती. त्यांनी पहिली साधी आणि अल्पकालीन जनुक प्रत (पीसीआरच्या पहिल्या दोन चक्र प्रतिक्रियांसारखी) प्रकाशित केली.आज विकसित केलेला पीसीआर डॉ. कॅरी बी. मुलिस यांनी 1983 मध्ये विकसित केला होता. डॉ. मुलिस यांनी त्या वर्षी पीई कंपन्यांना सेवा दिली, त्यामुळे पीईला पीसीआर उद्योगात विशेष दर्जा आहे.डॉ. मुलिस यांनी 1985 मध्ये सायकी आणि इतरांसह पहिला संबंधित पेपर अधिकृतपणे प्रकाशित केला. तेव्हापासून, पीसीआरचा वापर दिवसाला हजारो मैलांचा आहे, आणि संबंधित पेपरच्या गुणवत्तेमुळे इतर अनेक संशोधन पद्धती अप्रिय आहेत असे म्हणता येईल.त्यानंतर, PCR तंत्रज्ञानाचा जैविक वैज्ञानिक संशोधन आणि नैदानिक ​​​​उपयोगांमध्ये मोठ्या प्रमाणावर वापर केला जातो, जे आण्विक जीवशास्त्र संशोधनाचे सर्वात महत्वाचे तंत्रज्ञान बनले आहे.मुलिस यांना १९९३ चे रसायनशास्त्रातील नोबेल पारितोषिकही मिळाले.

पीसीआरतत्त्व

पीसीआर तंत्रज्ञानाचे मूलभूत तत्त्व डीएनएच्या नैसर्गिक प्रतिकृती प्रक्रियेसारखेच आहे आणि त्याची विशिष्टता ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड प्राइमरवर अवलंबून असते जी लक्ष्य अनुक्रमाच्या दोन्ही टोकांना पूरक असते.पीसीआर हे डीजनरेशन-अॅनिलिंग-विस्ताराच्या तीन मूलभूत प्रतिक्रिया पायऱ्यांनी बनलेले आहे: ① टेम्पलेट डीएनएचे ऱ्हास: टेम्पलेट डीएनए ठराविक कालावधीसाठी सुमारे 93 डिग्री सेल्सिअस गरम केल्यानंतर, दुहेरी-साखळी डीएनएसाठी दुहेरी डीएनए सोल्यूशन पीसीआर अॅम्प्लीफिकेशनद्वारे तयार केले जाते, जेणेकरुन टेम्प्लेट डीएनएसाठी प्राइमरी बनवता येईल. पुढील फेरीची प्रतिक्रिया.② टेम्पलेट डीएनए आणि प्राइमरचे अॅनिलिंग (संयुग): टेम्पलेट डीएनए गरम झाल्यानंतर आणि एकाच शृंखलामध्ये क्षीण झाल्यानंतर, तापमान सुमारे 55 डिग्री सेल्सियस पर्यंत खाली येते.प्राइमर आणि टेम्पलेट डीएनए सिंगल-चेनचा पूरक क्रम.③प्राइमरचा विस्तार: DNA टेम्पलेट-प्राइमर बाइंडिंग TaqDNA पॉलिमरेझच्या क्रियेवर आधारित आहे, dNTP ही प्रतिक्रिया कच्चा माल आहे.प्रतिकृतीचे तत्त्व ठेवा, टेम्पलेट DNA साखळीला पूरक असलेल्या नवीन अर्ध-आरक्षित कॉपी चेनचे संश्लेषण करा आणि सायकल डीजनरेशन-अॅनिलिंग-एक्सटेन्शन तीन प्रक्रिया पुन्हा केल्याने अधिक "अर्ध-आरक्षित कॉपी चेन" मिळू शकते आणि ही नवीन साखळी पुन्हा उपलब्ध आहे पुढील सायकलसाठी टेम्पलेट व्हा.लूप पूर्ण करण्यासाठी 2-4 मिनिटे लागतात, लक्ष्य जनुक 2-3 तासांत अनेक दशलक्ष वेळा वाढवता येते.

मानकपीसीआरप्रतिक्रिया प्रणाली

पीसीआर प्रतिक्रियाचे पाच घटक

PCR प्रतिक्रियामध्ये प्रामुख्याने पाच प्रकारचे पदार्थ सामील असतात, ते म्हणजे प्राइमर, एन्झाइम, dNTP, टेम्पलेट आणि बफर (Mg2+ आवश्यक आहे).[पीसीआर प्रक्रिया]

मानक पीसीआर प्रक्रिया तीन चरणांमध्ये विभागली गेली आहे

1. DNA झीज (90°C-96°C): थर्मल ऍक्शन अंतर्गत ड्युअल-चेन DNA टेम्पलेट्स, हायड्रोजन बंध तुटतात, एकल-साखळी DNA तयार करतात.

2. एनीलिंग (25℃ -65℃): सिस्टम तापमान कमी केले जाते, प्राइमर स्थानिक दुहेरी-साखळी तयार करण्यासाठी DNA टेम्पलेटसह एकत्र केले जाते.

3. विस्तार (70℃ -75℃): Taq एन्झाइमच्या क्रियेत (सुमारे 72°C, सर्वोत्तम क्रिया), dNTP कच्चा माल म्हणून वापरला जातो, प्राइमरच्या 5′ टोकापासून → 3′ टोकापर्यंत विस्तारित होतो, संश्लेषण आणि टेम्पलेट एकमेकांना DNA साखळी पूरक करतात.

प्रत्येक चक्र डीएनए सामग्री दुप्पट करून, विकृत, अॅनिल आणि विस्तारित केले जाते.सध्या, लहान प्रवर्धन क्षेत्रामुळे, Taq एन्झाइमची क्रिया इष्टतम नसली तरीही, काही PCR फारच कमी वेळात प्रतिकृती बनवता येतात, म्हणून ते दोन चरणांमध्ये बदलले जाऊ शकते, म्हणजेच, अॅनिलिंग आणि विस्तार एकाच वेळी 60°C-65°C वर केले जाऊ शकते.उचलण्याची आणि थंड करण्याची प्रक्रिया कमी करण्यासाठी आणि प्रतिसादाची गती सुधारण्यासाठी.

पीसीआर प्रतिक्रिया वैशिष्ट्ये

● उच्च-विशिष्टता

PCR प्रतिसादाचे विशिष्ट निर्णायक घटक आहेत: ①प्राइमर आणि टेम्पलेट डीएनएचे विशिष्ट संयोजन.②बेस पेअरिंगचे तत्त्व.③ TaqDNA पॉलिमरेझ संश्लेषण प्रतिक्रियेची निष्ठा.④ लक्ष्य जनुकाची विशिष्टता आणि पुराणमतवादीपणा.

प्राइमर्स आणि टेम्पलेट्सचे योग्य संयोजन ही मुख्य गोष्ट आहे.प्राइमर आणि टेम्प्लेटचे बंधन आणि प्राइमर चेनचा विस्तार अल्कधर्मी बेस जुळणीच्या तत्त्वावर आधारित आहे.पॉलिमरेझ संश्लेषण अभिक्रियांची निष्ठा आणि प्रतिक्रियेतील टेम्पलेट आणि प्राइमरचे बंधन (संयुग) बनविण्यासाठी Taq DNA पॉलिमरेझचा उच्च तापमान प्रतिकार उच्च तापमानात केला जाऊ शकतो.संयोजनाची विशिष्टता मोठ्या प्रमाणात वाढली आहे.क्लिप उच्च प्रमाणात अचूकता राखू शकते.उच्च रूढिवादीपणा आणि उच्च रूढीवादीपणासह लक्ष्य अनुवांशिक क्षेत्र निवडून, त्याची विशिष्टता अधिक आहे.

● उच्च संवेदनशीलता

PCR उत्पादनांचे उत्पादन प्रमाण निर्देशांकाने वाढवले ​​जाते, जे मायक्रोकंट्रोलरची पातळी मायक्रोग्राम (μg= -6) पर्यंत वाढवण्यासाठी पिकर (PG=10-12) च्या प्रारंभिक टेम्पलेटचा विस्तार करू शकते.1 दशलक्ष पेशींमधून लक्ष्य पेशी शोधल्या जाऊ शकतात;व्हायरस शोधताना, पीसीआरची संवेदनशीलता 3 आरएफयूपर्यंत पोहोचू शकते (रिक्त स्पॉट्स बनलेले युनिट);जिवाणू विज्ञानातील किमान शोध दर 3 जीवाणू आहे.

● साधे आणि जलद

पीसीआर रिफ्लेक्शनमध्ये उच्च-तापमान ताक डीएनए पॉलिमरेझचा वापर केला जातो, जो एका वेळी प्रतिक्रिया सोल्यूशन जोडतो, म्हणजे डीएनए अॅम्प्लीफिकेशन सोल्यूशन आणि वॉटर बाथ पॉटवर डीजनरेशन-अॅनियल-विस्तार प्रतिक्रिया.साधारणपणे, प्रवर्धन प्रतिक्रिया 2 ते 4 तासांत पूर्ण होते.संवर्धित उत्पादनांचे सामान्यत: विद्युत तलवारीने विश्लेषण केले जाते आणि त्यांना समस्थानिक वापरण्याची गरज नाही, किरणोत्सर्गी प्रदूषण नाही आणि सुलभ जाहिरात.

● नमुन्याची शुद्धता कमी आहे

व्हायरस किंवा बॅक्टेरिया आणि कल्चर सेल वेगळे करण्याची गरज नाही.डीएनए क्रूड उत्पादने आणि आरएनए अॅम्प्लिफायर म्हणून वापरले जाऊ शकतात.रक्त, शरीरातील द्रव, खोकला धुण्याचे द्रव, केस, पेशी आणि जिवंत ऊती यासारख्या क्लिनिकल नमुने वापरून डीएनए प्रवर्धन शोध थेट वापरला जाऊ शकतो.

पीसीआरसामान्य समस्या

● खोटे ऋण, कोणतेही प्रवर्धित बँड नाहीत

पीसीआर प्रतिक्रियेच्या मुख्य टप्प्यांमध्ये हे समाविष्ट आहे: ① टेम्पलेट न्यूक्लिक अॅसिड तयार करणे, ② गुणवत्ता आणि प्राइमर्सची विशिष्टता, ③ एन्झाईमची गुणवत्ता ④ पीसीआर चक्र परिस्थिती.कारण शोधण्यासाठी वरील लिंक्सचे विश्लेषण आणि अभ्यास देखील केला पाहिजे.

टेम्पलेट्स: ① टेम्पलेटमध्ये विविध प्रथिने असतात, ② टेम्पलेटमध्ये Taq एन्झाइम इनहिबिटर असते, ③ टेम्पलेटमधील प्रथिने काढून टाकली जात नाहीत, विशेषत: गुणसूत्रातील गट प्रथिने.⑤ डिमिनर न्यूक्लिक अॅसिड डिजनरेशन कसून नाही.जेव्हा एन्झाईम्स आणि प्राइमर्सची गुणवत्ता चांगली असते, तेव्हा कोणतेही अॅम्प्लीफिकेशन बँड नसते, जे बहुधा नमुन्यांचे पाचक उपचार असते.टेम्प्लेट न्यूक्लिक अॅसिड काढण्याच्या प्रक्रियेत काहीतरी गडबड आहे, त्यामुळे प्रभावी आणि स्थिर पचन उपाय तयार करण्यासाठी, त्याची प्रक्रिया निश्चित केली पाहिजे आणि अनियंत्रितपणे बदलू नये.

एन्झाईम निष्क्रियता: एंजाइमची क्रिया नष्ट झाली आहे किंवा अपुरी आहे की नाही याचे विश्लेषण करण्यासाठी नवीन एन्झाइम किंवा जुने आणि नवीन दोन्ही एन्झाईम एकत्र वापरले पाहिजेत, ज्यामुळे चुकीचे नकारात्मक परिणाम होतात.हे नोंद घ्यावे की Taq एन्झाइम किंवा एथिडियम ब्रोमाइड कधीकधी विसरले जाते.

प्राइमर: प्राइमरची गुणवत्ता, प्राइमरची एकाग्रता आणि दोन प्राइमर्सची एकाग्रता सममितीय आहे की नाही.पीसीआर बिघाड होण्याचे किंवा वाढणारे बँड आदर्श नसणे आणि पसरण्याची प्रवण नसणे हे एक सामान्य कारण आहे.काही बॅच क्रमांकांच्या प्राइमर्सच्या गुणवत्तेत समस्या आहेत.दोन प्राइमर्समध्ये उच्च एकाग्रता आणि कमी एकाग्रता असते, ज्यामुळे कमी-कार्यक्षमता असममित प्रवर्धन होते.प्रतिकारक उपाय आहेत: ① युनिट्सचे संश्लेषण करण्यासाठी एक चांगला प्राइमर निवडा.② प्राइमरची एकाग्रता केवळ OD मूल्यावर अवलंबून नाही, तर अग्र साखर जेल इलेक्ट्रोफोरेसीस करण्यासाठी प्राइमरच्या मूळ द्रवाकडे देखील लक्ष देते.प्राइमर स्ट्रिप झोन असणे आवश्यक आहे आणि दोन प्राइमर्सची चमक सामान्यतः सुसंगत असावी.यावेळी बेल्ट, पीसीआर अयशस्वी होऊ शकतात आणि प्राइमर सिंथेसिस युनिटसह त्याचे निराकरण केले पाहिजे.प्राइमर जास्त असल्यास, ब्राइटनेस कमी असेल आणि पातळ केल्यावर त्याची एकाग्रता संतुलित असणे आवश्यक आहे.③ रेफ्रिजरेटरचे एकाधिक गोठलेले किंवा दीर्घकालीन रेफ्रिजरेशन भाग टाळण्यासाठी प्राइमरला पैसे दिले पाहिजे आणि उच्च एकाग्रतेमध्ये साठवले पाहिजे, ज्यामुळे प्राइमर खराब होईल आणि खराब होईल.④ प्राइमरची रचना अवास्तव आहे, जसे की प्राइमरची लांबी अपुरी आहे आणि प्राइमर्समध्ये डि क्लस्टर तयार होतो.

Mg2+एकाग्रता: Mg2+आयन एकाग्रतेचा PCR प्रवर्धन कार्यक्षमतेवर मोठा प्रभाव पडतो.अत्यधिक एकाग्रता पीसीआर प्रवर्धनाच्या विरुद्ध लिंग कमी करू शकते.एकाग्रता खूप कमी असल्यास, PCR अॅम्प्लीफिकेशन आउटपुट विस्तार बँडशिवाय PCR अॅम्प्लिफिकेशन अयशस्वी देखील करेल.

रिअॅक्शन व्हॉल्यूममध्ये बदल: PCR अॅम्प्लीफिकेशनमध्ये वापरलेला व्हॉल्यूम 20ul, 30ul, आणि 50ul किंवा 100uL आहे, PCR अॅम्प्लिफिकेशनसाठी मोठ्या प्रमाणात अॅप्लिकेशन वैज्ञानिक संशोधन आणि क्लिनिकल चाचणीच्या वेगवेगळ्या उद्देशांनुसार सेट केले जाते.20ul सारख्या लहान व्हॉल्यूम बनविल्यानंतर, आकार तयार करताना कॉर्ड कंडिशन करणे आवश्यक आहे, अन्यथा ते अयशस्वी होईल.

भौतिक कारणे: पीसीआर प्रवर्धनासाठी परिवर्तन खूप महत्त्वाचे आहे.जर अधोगती तापमान कमी असेल, तर झीज होण्याची वेळ कमी असेल, ती खोट्या नकारात्मकतेमध्ये होण्याची शक्यता आहे;खूप कमी अॅनिलिंग तापमानामुळे विशिष्ट नसलेले प्रवर्धन होऊ शकते आणि विशिष्ट प्रवर्धन कार्यक्षमता कमी होऊ शकते.PCR अॅम्प्लीफिकेशन कार्यक्षमता कमी करण्यासाठी प्राइमर्स आणि टेम्पलेट्सच्या संयोजनावर जास्त परिणाम होतो.काहीवेळा एक्स्टेंशन किंवा वॉटर-सोल्युबल कुकरमधील परिवर्तनशीलता, अॅनिलिंग आणि विस्तारित तापमान शोधण्यासाठी मानक थर्मामीटर वापरणे आवश्यक आहे, जे पीसीआरच्या अपयशाचे एक कारण आहे.

लक्ष्य क्रम रूपे: लक्ष्य अनुक्रम आढळल्यास, उत्परिवर्तन किंवा हटविणे, नमुना आणि टेम्पलेटचे संयोजन एकत्र केले असल्यास किंवा लक्ष्य अनुक्रमाच्या अभावामुळे, प्राइमर आणि टेम्पलेट पूरक अनुक्रम गमावतील आणि त्याचे PCR प्रवर्धन यशस्वी होणार नाही.

● असत्य सकारात्मक

PCR अॅम्प्लीफिकेशन बँड लक्ष्य अनुक्रम बँडशी सुसंगत दिसतो आणि कधीकधी त्याचा बँड अधिक व्यवस्थित आणि उच्च असतो.

प्राइमर डिझाईन योग्य नाही: निवडलेला प्रवर्धक क्रम आणि अ-उद्देशीय प्रवर्धन अनुक्रम एकसंध असतो, त्यामुळे जेव्हा पीसीआर प्रवर्धन होते, तेव्हा प्रवर्धित पीसीआर उत्पादने हे उद्दिष्ट नसलेले अनुक्रम असतात.लक्ष्य क्रम खूप लहान आहे किंवा प्राइमर खूप लहान आहे आणि ते चुकीचे सकारात्मक होण्यास प्रवण आहे.पुन्हा डिझाइन करणे आवश्यक आहे.

लक्ष्य अनुक्रम किंवा प्रवर्धन उत्पादनांचे क्रॉस प्रदूषण: या प्रदूषणाची दोन कारणे आहेत: प्रथम, संपूर्ण जीनोम किंवा मोठ्या विभागांचे क्रॉस-प्रदूषण, ज्यामुळे चुकीचे सकारात्मक परिणाम होतात.या प्रकारची खोटी सकारात्मकता खालील पद्धतींनी सोडवली जाऊ शकते: लक्ष्य क्रम सॅम्पल गनमध्ये इनहेल होण्यापासून किंवा सेंट्रीफ्यूगल ट्यूबमधून बाहेर येण्यापासून रोखण्यासाठी ऑपरेशन दरम्यान सावध आणि सौम्य रहा.एंजाइम आणि पदार्थ वगळता जे उच्च तापमानाचा सामना करू शकत नाहीत, सर्व अभिकर्मक किंवा उपकरणे उच्च दाबाने निर्जंतुक केली पाहिजेत.सेंट्रीफ्यूगल पाईप्स आणि नमुने एकाच वेळी वापरावेत.आवश्यक असल्यास, नमुने जोडण्यापूर्वी, प्रतिक्रिया ट्यूब आणि अभिकर्मक अल्ट्राव्हायोलेट किरणांच्या संपर्कात येतात ज्यामुळे विद्यमान न्यूक्लिक अॅसिड नष्ट होते.दुसरे, वायू प्रदूषणातील लहान तुकडे.हे लहान तुकडे लक्ष्य अनुक्रमापेक्षा लहान आहेत, परंतु त्यांच्याकडे विशिष्ट समरूपता आहे.ते एकमेकांशी जोडले जाऊ शकते.प्राइमर्सची पूर्तता केल्यानंतर, पीसीआर उत्पादनाचा विस्तार केला जाऊ शकतो, ज्यामुळे खोटे सकारात्मक उत्पादन होईल.हे घरटे पीसीआर पद्धत कमी करण्यासाठी किंवा काढून टाकण्यासाठी वापरले जाऊ शकते.

● गैर-विशिष्ट प्रवर्धन बँड दिसणे

PCR प्रवर्धनानंतर दिसणारे बँड अपेक्षित आकाराशी विसंगत आहेत, किंवा मोठे किंवा लहान, किंवा त्याच वेळी, किंवा त्याच वेळी, विशिष्ट प्रवर्धन बँड आणि गैर-विशिष्ट प्रवर्धन बँड.नॉन-विशिष्ट बँडचा उदय आहे: प्रथम, प्राइमर लक्ष्य अनुक्रमासाठी अपूर्ण पूरक आहेत, किंवा डाय क्लस्टर तयार करण्यासाठी प्राइमरचे पॉलिमरायझेशन.दुसरे म्हणजे MG2+आयनची एकाग्रता खूप जास्त आहे, अॅनिलिंग तापमान खूप कमी आहे आणि पीसीआर चक्रांची संख्या संबंधित आहे.दुसरे म्हणजे, एन्झाइमची गुणवत्ता आणि प्रमाण.बर्‍याचदा, काही स्त्रोतांचे एंझाइम गैर-विशेष बँड्ससाठी प्रवण असतात आणि इतर स्त्रोतांचे एन्झाईम उद्भवत नाहीत.कधीकधी एनजाइमचे विशिष्ट नसलेले प्रवर्धन देखील होते.काउंटरमेजर्स आहेत: आवश्यक असल्यास आकर्षक पुन्हा डिझाइन करा.एंझाइमचे प्रमाण कमी करा किंवा दुसर्‍या स्त्रोताचे एन्झाइम बदला.प्राइमरीचे प्रमाण कमी करा, टेम्पलेट्सचे प्रमाण योग्यरित्या वाढवा आणि सायकलची संख्या कमी करा.एनीलिंग तापमान योग्यरित्या वाढवा किंवा दोन तापमान बिंदू पद्धती वापरा (93 डिग्री सेल्सिअस डीजेनेरेशन, एनीलिंग आणि सुमारे 65 डिग्री सेल्सिअस वर वाढवणे).

● फ्लॅकी टो किंवा स्मीअर टेप दिसणे

पीसीआर प्रवर्धन कधीकधी लागू केलेले किंवा शेल केलेले किंवा कार्पेट सारखे बेल्ट दिसते.कारणास्तव, एन्झाईम्सच्या जास्त प्रमाणात किंवा एन्झाईमच्या खराब गुणवत्तेमुळे, dNTP एकाग्रता खूप जास्त आहे, Mg2+ एकाग्रता खूप जास्त आहे, अॅनिलिंग तापमान खूप कमी आहे आणि चक्रांची संख्या खूप जास्त आहे.काउंटरमेजर्स आहेत: ①एंझाइम्सचे प्रमाण कमी करा किंवा दुसर्‍या स्त्रोताचे एन्झाइम बदला.②dNTP ची एकाग्रता कमी करा ③योग्यरित्या Mg2+ एकाग्रता कमी करा.④ टेम्पलेट्सचे प्रमाण वाढवा आणि चक्रांची संख्या कमी करा.

संबंधित उत्पादने

PCR Heroᵀᴹ (रंगासह)

◮ उच्च निष्ठा: सामान्य Taq एन्झाइमच्या 6 पट;

◮ जलद प्रवर्धन गती

◮ अधिक टेम्पलेट अनुकूलता

◮ उच्च प्रवर्धन कार्यक्षमता

◮ पर्यावरणीय सहिष्णुता अधिक मजबूत आहे: 90% पेक्षा जास्त क्रियाकलाप राखून, एका आठवड्यासाठी 37°C वर ठेवा;

◮ यात 5'→3' डीएनए पॉलिमरेझ क्रियाकलाप आणि 5'→3' एक्सोन्यूक्लीज क्रियाकलाप आहे, 3'→5' एक्सोन्यूक्लीज क्रियाकलापाशिवाय.

PCR Easyᴹ (रंगासह)

अद्वितीय प्रतिक्रिया प्रणाली आणि उच्च-कार्यक्षमता Taq DNA पॉलिमरेझ PCR प्रतिक्रियेला उच्च प्रवर्धन कार्यक्षमता, विशिष्टता आणि संवेदनशीलता बनवते.

RT-qPCR Easyᵀᴹ (एक टप्पा)-SYBR ग्रीन I

◮ वन-स्टेप किट रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन आणि qPCR एकाच ट्यूबमध्ये दोन प्रतिक्रिया बनवते, फक्त टेम्पलेट RNA, विशिष्ट PCR प्राइमर्स आणि RNase-फ्री ddH जोडणे आवश्यक आहे₂O.

◮ किट त्वरीत आणि कार्यक्षमतेने व्हायरल RNA चे परिमाणात्मक विश्लेषण करू शकते किंवा RNA शोधू शकते.

◮ किट एक अद्वितीय फोरजीन रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन अभिकर्मक आणि फोरजीन हॉटस्टार टाक डीएनए पॉलिमरेझ वापरते आणि अभिक्रियाची प्रवर्धन कार्यक्षमता आणि विशिष्टता प्रभावीपणे सुधारण्यासाठी अद्वितीय प्रतिक्रिया प्रणालीसह एकत्रित करते.

◮ ऑप्टिमाइझ केलेली प्रतिक्रिया प्रणाली प्रतिक्रियेला उच्च शोध संवेदनशीलता, मजबूत थर्मल स्थिरता आणि चांगली सहनशीलता बनवते.

◮ RT-qPCR सोपे^TM(एक पायरी)-SYBR ग्रीन I किट ROX अंतर्गत संदर्भ रंगासह येते, ज्याचा वापर सिग्नल पार्श्वभूमी आणि विहिरींमधील सिग्नल त्रुटी दूर करण्यासाठी केला जाऊ शकतो, जे ग्राहकांना परिमाणात्मक पीसीआर उपकरणांच्या विविध मॉडेल्समध्ये वापरण्यास सोयीचे आहे.

RT सोपे^TMII (यासाठी मास्टर प्रीमिक्स साठी प्रथम-स्ट्रँड सीडीएनए संश्लेषणरिअल टाइम पीसीआर)

-जीडीएनए काढण्याची कार्यक्षम क्षमता, जी 2 मिनिटांत टेम्पलेटमधील जीडीएनए काढू शकते.

-कार्यक्षम रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन सिस्टम, पहिल्या स्ट्रँड सीडीएनएचे संश्लेषण पूर्ण करण्यासाठी केवळ 15 मिनिटे लागतात.

-जटिल टेम्पलेट्स: उच्च GC सामग्री आणि जटिल दुय्यम रचना असलेले टेम्पलेट्स देखील उच्च कार्यक्षमतेसह उलट केले जाऊ शकतात.

-उच्च-संवेदनशीलता रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन सिस्टम, pg-स्तरीय टेम्पलेट्स देखील उच्च-गुणवत्तेचे cDNA मिळवू शकतात.

-रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन सिस्टीममध्ये उच्च थर्मल स्थिरता आहे, इष्टतम प्रतिक्रिया तापमान 42℃ आहे आणि तरीही 50℃ वर रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन कामगिरी चांगली आहे.