तुला किती माहिती आहे

बद्दल एनयुक्लिक ऍसिड काढणे

शुद्ध न्यूक्लिक अॅसिडची सुरुवात आणि शेवट

सुरुवातीला सर्वकाही कठीण आहे, शुद्ध न्यूक्लिक अॅसिड सर्वात जास्त आहे

आण्विक प्रयोगांची सुरुवात, त्यानंतरच्या प्रयोगांसाठी

यश किंवा अपयशाचा निर्णायक प्रभाव असतो.

ट्रेस/अल्ट्रा-ट्रेस यूव्ही स्पेक्ट्रोफोटोमीटरला अनेक वैज्ञानिक संशोधकांनी पसंती दिली आहे कारण ते न्यूक्लिक अॅसिड एकाग्रता आणि प्रथिने आणि मीठ आयन अवशेष सहजपणे, जलद आणि आर्थिकदृष्ट्या शोधू शकतात.

आपल्या सर्वांना माहित आहे की, A260 म्हणजे न्यूक्लिक अॅसिड शोषक OD मूल्य, A280 म्हणजे प्रथिने एकाग्रता शोषक OD मूल्य, A230 म्हणजे मीठ आयन एकाग्रता शोषक OD मूल्य, म्हणून A260 म्हणजे न्यूक्लिक अॅसिड एकाग्रतेचे रूपांतर करू शकते, A260/280 म्हणजे प्रथिने अवशेष, A260/260 या संशोधनावर आधारित हे प्रोटीन अवशेष, A260/260 द्वारे शोधले गेले आहे. मोठ्या संख्येने मोजमाप परिणामांवर, आणि ते आहे ”पारंपारिकडीएनए आणि आरएनएच्या शुद्धतेचे स्पष्टीकरण देऊ शकते यावर विश्वास ठेवणेएका विशिष्ट मर्यादेपर्यंत.न्यूक्लिक अॅसिड उत्पन्न आणि शुद्धता ओळखण्यासाठी हे एकमेव मानक नाही, ते केवळ संदर्भ म्हणून वापरले जाते आणि ते "गोल्ड मानक" नाही.

थर्मो फिशर ND-2000 मॅन्युअल चाचणी निकालांच्या विश्वासार्हतेवर भर देते

कारण असे आहे की मायक्रो/अल्ट्रामायक्रो यूव्ही स्पेक्ट्रोफोटोमीटर वापरून प्राप्त झालेले परिणाम केवळ बाजूने न्यूक्लिक अॅसिडचे उत्पन्न आणि शुद्धता दर्शवतात आणि अनेक प्रभावकारी घटक आहेत (ऑप्टिकल पथ, नमुना खंड, नमुना एकाग्रता, pH मूल्य, शोषक मापनावर परिणाम करणारे इतर आयन, इ.) , ओडी मूल्य आवश्यकपणे मोजले जात नाही.त्याच वेळी, शोषक मूल्य निर्धारण सामग्रीच्या विशिष्टतेच्या कमतरतेमुळे, सिंगल-स्ट्रँडेड DNA, डबल-स्ट्रँडेड DNA, RNA, dNTPs आणि काही प्रथिने सर्वांची शोषण शिखरे 260nm तरंगलांबीवर आहेत आणि केवळ A260 द्वारे निर्धारित केलेली एकाग्रता DNA किंवा वास्तविक RNA असणे आवश्यक नाही.एकाग्रता, आणि त्याची अखंडता आणि अधोगती यांचा न्याय करता येत नाही.

मग आपल्या शुद्ध केलेल्या न्यूक्लिक अॅसिडच्या गुणवत्तेचा न्याय कसा करायचा?शोधण्यासाठी मायक्रो/अल्ट्रामायक्रो यूव्ही स्पेक्ट्रोफोटोमीटर वापरण्याव्यतिरिक्त, न्यूक्लिक अॅसिडची शुद्धता आणि अखंडता दृष्यदृष्ट्या प्रदर्शित करण्यासाठी आणि एका विशिष्ट मर्यादेपर्यंत एकाग्रता दर्शवण्यासाठी अॅग्रोज जेल इलेक्ट्रोफोरेसीस सारख्या पद्धती देखील आवश्यक आहेत.अशाप्रकारे, विविध पद्धतींच्या शोध परिणामांमधून मिळणारे न्यूक्लिक अॅसिड उत्पन्न आणि शुद्धता विश्वासार्ह आहे.

प्रायोगिक चार्ट तुलना

H1299 पेशींचा जीनोमिक डीएनए कंपनी A च्या DNA एक्स्ट्रॅक्शन किटचा वापर करून काढला गेला आणि लक्षणीय अशुद्धता दूषित दिसून आली, परिणामी उच्च OD मूल्ये

(OD मापन मूल्य आणि संबंधित इलेक्ट्रोफेरोग्राम)

मूल्यमापन निर्देशांक

न्यूक्लिक अॅसिड उत्पादन आणि गुणवत्ता चाचणीसाठी "गोल्ड मानक" आहे का?

आपल्या माहितीनुसार, कोणतीही सोपी, जलद आणि स्वस्त पद्धत नाही.स्पेक्ट्रोफोटोमीटर, जेल इलेक्ट्रोफोरेसीस किंवा मास स्पेक्ट्रोमेट्री असो, ते सर्व वेगवेगळ्या पैलूंमधून द्रावणातील न्यूक्लिक अॅसिडची एकाग्रता आणि शुद्धता प्रतिबिंबित करतात आणि एकमेकांचा संदर्भ देऊन त्यांचा न्याय करणे आवश्यक आहे.

सर्वोत्तम मूल्यमापन निर्देशांक नेहमीच असतोफॉलो-अप प्रायोगिक अनुप्रयोग.हे रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन आणि पीसीआर अॅम्प्लीफिकेशनच्या कार्यक्षमतेवर परिणाम करत नाही.विश्वसनीय प्रवर्धक उत्पादने आणि Ct मूल्ये मिळवणे आणि अनुक्रमाने संपूर्ण क्रम प्राप्त करणे हे यशस्वी न्यूक्लिक अॅसिड निष्कर्षण आहे.

सारांश, केवळ गुणोत्तर सिद्धांताच्या दृष्टिकोनाला "चांगले उतारा पॅरामीटर्स म्हणून चांगले डाउनस्ट्रीम प्रायोगिक परिणाम वापरणे" या दृष्टिकोनातून आव्हान दिले पाहिजे!

उच्च डीएनए/आरएनए शुद्धता मिळविण्यासाठी शिफारस केलेले फोरजीन डीएनए आरएनए एक्सट्रॅक्शन किट:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/