आघाडी

लाँग नॉन-कोडिंग RNA, lncRNA एक नॉन-कोडिंग RNA आहे ज्याची लांबी 200 nucleotides पेक्षा जास्त असते, साधारणपणे 200-100000 nt.lncRNA एपिजेनेटिक, ट्रान्सक्रिप्शन आणि पोस्ट-ट्रान्सक्रिप्शनल स्तरांवर जनुक अभिव्यक्ती नियंत्रित करते आणि X क्रोमोसोम सायलेन्सिंग, जीनोम इंप्रिंटिंग आणि क्रोमॅटिन बदल, ट्रान्सक्रिप्शन सक्रियकरण, ट्रान्सक्रिप्शन हस्तक्षेप, अणु वाहतूक, सेल सायकल नियमन, सेल डिफरेंशिएशन कॉम्प्रेशन आणि इतर कॉम्प्रेशन इफेक्ट्स आणि इतर कॉम्प्रेशन इफेक्ट्समध्ये भाग घेते. मानवी रोगांच्या घटना, विकास आणि प्रतिबंध यांच्याशी जवळचा संबंध आहे आणि सध्या बायोमेडिसिनच्या क्षेत्रातील हॉट स्पॉट्सपैकी एक आहे.

01  LncRNA चे प्रकार आणि वैशिष्ट्ये

lncRNA त्याच्या निर्मितीच्या विविध स्त्रोतांनुसार अनेक प्रकारांमध्ये विभागले गेले आहे, वरील आकृतीमध्ये दर्शविल्याप्रमाणे.खालील वैशिष्ट्ये आहेत:

1. lncRNAs सामान्यत: लांब असतात, डायनॅमिक अभिव्यक्ती आणि भिन्नतेदरम्यान वेगवेगळ्या स्प्लिसिंग पद्धतींसह
2. कोडिंग जनुकांच्या तुलनेत, lncRNA मध्ये सामान्यतः कमी अभिव्यक्ती पातळी असते
3. बहुतेक lncRNAs मध्ये ऊतींचे भेदभाव आणि विकास प्रक्रियेत स्पष्ट तात्पुरती आणि अवकाशीय अभिव्यक्ती विशिष्टता असते.
4. ट्यूमर आणि इतर रोगांमध्ये वैशिष्ट्यपूर्ण अभिव्यक्ती आहेत
5. lncRNA चे उपसेल्युलर स्थान वैविध्यपूर्ण आहेत
6. क्रम संवर्धन कमी आहे, परंतु कार्यामध्ये विशिष्ट प्रमाणात संवर्धन इ.

02 LncRNA रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शनबद्दल वारंवार विचारले जाणारे प्रश्न

पेशींमध्ये lncRNA ची कमी सामग्री, लांबलचक लांबी आणि उच्च-स्तरीय संरचनेमुळे, अशा RNA मध्ये अनेकदा स्टेम लूप किंवा हेअरपिनसारख्या जटिल संरचना असतात आणि RT-qPCR अयशस्वी रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन किंवा कमी कार्यक्षमतेच्या समस्यांना बळी पडतात.

03 LncRNA रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन सोल्यूशन

मध्यवर्ती नियमानुसार, आरएनए विषाणू त्यांच्या स्वतःच्या रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेसचा वापर करून डीएनएचे संश्लेषण करण्यासाठी आरएनएचा साचा म्हणून वापर करतात या प्रक्रियेला रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन म्हणतात.विट्रोमध्ये सीडीएनए टेम्पलेटचे संश्लेषण करण्यासाठी आरएनए व्हायरस रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस वापरण्याच्या प्रक्रियेला रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन म्हणतात.रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन सिस्टममध्ये समाविष्ट असलेले मुख्य घटक: आरएनए टेम्पलेट, रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस, प्राइमर्स आणि इतर घटक.

1.RNA टेम्पलेट

रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शनवर आरएनए टेम्प्लेटचा प्रभाव त्याच्या रचना, शुद्धता आणि अखंडतेमध्ये दिसून येतो.काढलेल्या RNA ची शुद्धता आणि अखंडता जितकी जास्त असेल तितकी रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शनची कार्यक्षमता जास्त असेल आणि त्यानंतरचे परिमाणवाचक परिणाम अधिक अचूक असतील.सामान्यतः वापरल्या जाणार्‍या आरएनए एक्सट्रॅक्शन अभिकर्मकांद्वारे शुद्ध केलेल्या आरएनएमध्ये अनेकदा अल्कोहोल आणि ग्वानिडाइन क्षारांचे अवशेष असतात, ज्याचा बहुतेक रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेसवर मजबूत प्रतिबंधात्मक प्रभाव असतो.

2.रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेस

संपूर्ण रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन सिस्टममध्ये रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेसचा मुख्य प्रभाव आहे.बहुतेक प्रयोगशाळांमध्ये वापरल्या जाणार्‍या रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेससाठी योग्य तापमान साधारणपणे 42°C असते.खरं तर, उच्च-स्तरीय आरएनए संरचना उघडण्यासाठी उच्च तापमानाची आवश्यकता असते आणि रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्टेसची आवश्यकता जास्त असते.

3.प्राइमर

रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन प्राइमर्समध्ये जीन-विशिष्ट प्राइमर्स, यादृच्छिक प्राइमर्स आणि ऑलिगो डीटी प्राइमर्सचा समावेश होतो.बहुतेक lncRNA मध्ये पॉलीए टेल नसतात, आणि ऑलिगो डीटी सह यादृच्छिक प्राइमर्स योग्यरित्या जुळणे महत्वाचे आहे.

4.इतर घटक

RNA कमी करणे विशेषतः सोपे आहे हे लक्षात घेता, रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन सिस्टममधील घटकांचा परिचय कमी केला जाऊ शकतो, ज्यामुळे RNase च्या प्रवेशास प्रभावीपणे प्रतिबंध करता येतो आणि रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शनची सुरळीत प्रगती सुनिश्चित होते.

FओरीजीनRNA टेम्प्लेट वरून मिळवते, qPCR मध्ये ट्रान्सक्रिप्शन उलट करा

तुमचा lncRNA शोध व्यापकपणे एस्कॉर्ट करा

प्राणी एकूण RNA Iसमाधानकिट (gDNA काढण्याच्या स्तंभासह)

सेल एकूण RNA Iसमाधानकिट (gDNA काढण्याच्या स्तंभासह)

Lnc-RT HeroTM I (gDNase सह)(lncRNA कडून प्रथम-स्ट्रँड cDNA संश्लेषणासाठी सुपर प्रीमिक्स)

रिअल टाइम पीसीआर इझीटीएम-एसवायबीआर ग्रीन I

Aफायदे ofआरएनए निष्कर्षण:

किटमध्ये तिसर्‍या पिढीचे RNA काढण्याचे तंत्रज्ञान वापरले जाते, DNase वापरण्याची गरज नाही.

96, 24, 12, आणि 6-वेल प्लेट कल्चर्ड सेल्सपासून 11 मिनिटे, उच्च-कार्यक्षमतेने gDNA-मुक्त, उच्च-शुद्धता, उच्च-गुणवत्तेचे एकूण सेल RNA.

lncRNA रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शनचे फायदे:

जीनोमिक डीएनए दूषितता त्वरीत काढून टाकण्यासाठी LncRNA साठी विशेषतः विकसित केलेली उलट प्रतिलेखन प्रणाली.

रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन सिस्टीममध्ये उच्च थर्मल स्थिरता आहे आणि तरीही 50 डिग्री सेल्सिअस तापमानात रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन चांगली आहे.

उच्च GC सामग्री आणि जटिल दुय्यम रचना असलेले टेम्पलेट उच्च कार्यक्षमतेसह उलट केले जाऊ शकतात.

फायदेof qपीसीआर:

हॉट स्टार्ट फोरजीन टाक पॉलिमरेझमध्ये उच्च प्रवर्धन कार्यक्षमता, उच्च प्रवर्धन संवेदनशीलता आणि उच्च प्रवर्धन विशिष्टता आहे

ऑप्टिमाइझ केलेले रिअल पीसीआर इझी मिक्स SYBR ग्रीन I ला उच्च शोध संवेदनशीलता बनवते आणि त्याची फ्लोरोसेन्स तीव्रता समान उत्पादनांच्या 3-5 पट आहे, जी विविध प्रकारच्या फ्लोरोसेन्स परिमाणात्मक प्रयोगांच्या गरजा पूर्ण करू शकते.