प्रयोग कर्मचार्‍यांचे वर्तन प्रमाणित करण्यासाठी PCR प्रयोग SOP स्थापित करा.
प्रयोगकर्ता ऑपरेटिंग प्रक्रियेचे काटेकोरपणे पालन करतो आणि मानवी घटकांमुळे होणारे PCR प्रदूषण कमी करतो किंवा प्रदूषणाच्या घटनेला प्रतिबंधित करतो.याशिवाय, प्रयोगकर्त्याकडे संबंधित उपकरणे चालवण्यात प्रवीणता, संपूर्ण कामाची प्रक्रिया स्पष्ट करणे, दूषित होण्याच्या उपचार पद्धती आणि प्रयोगशाळेच्या गुणवत्ता नियंत्रण पद्धतींमध्ये प्रभुत्व मिळवणे आणि चाचणी परिणामांचा योग्य अर्थ लावण्यास सक्षम असणे यासह संबंधित व्यावसायिक ज्ञान आणि कौशल्ये असणे आवश्यक आहे.
प्रमाणित पीसीआर प्रयोगशाळा स्थापन करा.
पीसीआर प्रयोगशाळेची तत्त्वतः चार भागात विभागणी केली आहे, म्हणजे अभिकर्मक तयार करण्याचे क्षेत्र, नमुना प्रक्रिया क्षेत्र, प्रवर्धन क्षेत्र आणि प्रवर्धन उत्पादन विश्लेषण क्षेत्र.पहिली दोन क्षेत्रे प्री-प्रवर्धक क्षेत्रे आहेत, आणि शेवटची दोन क्षेत्रे पोस्ट-प्रवर्धन क्षेत्रे आहेत.प्री-एम्प्लीफिकेशन झोन आणि पोस्ट-एम्प्लीफिकेशन झोन काटेकोरपणे वेगळे केले पाहिजेत.प्रायोगिक साहित्य, अभिकर्मक, रेकॉर्डिंग पेपर, पेन, साफसफाईची सामग्री इ. केवळ प्री-प्रवर्धक क्षेत्रापासून प्रवर्धनोत्तर क्षेत्रापर्यंत, म्हणजे अभिकर्मक तयार क्षेत्र → नमुना प्रक्रिया क्षेत्र → प्रवर्धन क्षेत्र → प्रवर्धन उत्पादन विश्लेषण क्षेत्रापासून प्रवाहित होऊ शकते आणि ते मागे वाहू नये.प्रयोगशाळेतील हवेचा प्रवाह प्री-प्रवर्धक क्षेत्रापासून प्रवर्धनोत्तर क्षेत्राकडे वाहायला हवा, आणि मागे वाहू नये.आदर्श पीसीआर प्रयोगशाळेची रचना खाली दर्शविली आहे:
आकृती A: बफर रूममध्ये नकारात्मक दाबासह आदर्श पीसीआर प्रयोगशाळा सेटअप मोड
आकृती ब: बफर रूममध्ये सकारात्मक दाबासह आदर्श पीसीआर प्रयोगशाळा सेटअप मोड
आकृती A आणि आकृती B मध्ये दिलेली PCR प्रयोगशाळा सेटअप आकृती अधिक आदर्श सेटअप मोड असावी आणि अटींसह प्रयोगशाळा डिझाइनसाठी या मोडचा संदर्भ घेऊ शकते.सामान्य प्रयोगशाळांसाठी, अशी शिफारस केली जाते की पीसीआर प्रवर्धन क्षेत्र आणि उत्पादन विश्लेषण क्षेत्र वेगळे केले जाऊ शकते आणि कव्हर उघडणे शक्य तितके नमुना तयार करण्याच्या क्षेत्रामध्ये आणि पीसीआर प्रवर्धन क्षेत्रामध्ये कमी केले जावे.लक्षात ठेवा: उत्पादन विश्लेषण क्षेत्रातील उत्पादने आणि प्रायोगिक पुरवठा नमुना तयार करण्याच्या क्षेत्रामध्ये आणि PCR प्रवर्धन क्षेत्रात नेण्यास सक्त मनाई आहे.
जर प्रयोगशाळेने फक्त पीसीआर शोधणे आणि ओळखणे केले तर, पारंपारिक पीसीआरऐवजी फ्लोरोसेंट परिमाणात्मक पीसीआर वापरण्याची शिफारस केली जाते.
फ्लूरोसेन्स परिमाणात्मक पीसीआर शोध परिणाम फ्लूरोसेन्स सिग्नलद्वारे गोळा आणि विश्लेषण केले जाऊ शकतात, त्यामुळे प्रतिक्रियेनंतर इलेक्ट्रोफोरेसीससाठी झाकण उघडण्याची आवश्यकता नाही, ज्यामुळे एरोसोल तयार करण्यासाठी प्रतिक्रिया उत्पादनांच्या गळतीमुळे पीसीआर उत्पादनाची दूषितता टाळली जाते.जेल इलेक्ट्रोफोरेसीसच्या लोडिंग चरणादरम्यान आपण कॅप ओपनिंगची संख्या वाढविल्यास, एरोसोल दूषित होण्याची शक्यता असते.परिमाणवाचक पीसीआरच्या वापरास प्रोत्साहन देण्याची आणि हळूहळू गुणात्मक पीसीआर बदलण्याची शिफारस केली जाते.
PCR प्रतिक्रियेसाठी UNG अँटी-पीसीआर उत्पादन दूषित प्रणाली वापरली जाते.
सिस्टम dTTP ऐवजी dUTP वापरते.पीसीआर प्रतिक्रियेनंतर, सर्व पीसीआर उत्पादने (डीएनए तुकडे) dUTP सह समाविष्ट केले जातात;पीसीआर प्रतिक्रियेच्या पुढील फेरीत, प्रणालीमध्ये जोडलेले UNG एंझाइम पीसीआरच्या 5 मिनिटे आधी 37°C वर उष्मायन केले जाते, जे विशेषतः dUTP असलेल्या सर्व डीएनए तुकड्यांना कमी करू शकते आणि नंतर पीसीआर प्रतिक्रिया करू शकते.हे पीसीआर उत्पादनांमुळे होणारे एरोसोल दूषित पूर्णपणे काढून टाकू शकते.प्रभाव खालील आकृतीमध्ये दर्शविला आहे:
टीप: थेट पीसीआर मालिकेसाठी, तुम्ही फोरजीनच्या अँटी-पीसीआर उत्पादन दूषित प्रणालीची मालिका उत्पादने निवडू शकता.सूचित
मोठ्या प्रमाणावर जीनोटाइपिंग चाचणी करणार्‍या प्रयोगशाळांसाठी, वाजवी प्रयोगशाळांच्या बांधकामाव्यतिरिक्त अभिकर्मकांच्या चाचणीसाठी UNG अँटी-पीसीआर उत्पादन दूषित प्रणाली वापरण्याची जोरदार शिफारस केली जाते.
स्मरणपत्र: या प्रणालीचा वापर केल्याने आधीच झालेली PCR उत्पादनाची दूषितता दूर होऊ शकत नाही.त्यामुळे, UNG प्रणालीचा वापर संबंधित चाचणीच्या सुरुवातीलाच केला जावा, आणि PCR प्रवर्धनासाठी UNG प्रणालीचा वापर केला जावा, जेणेकरून PCR उत्पादनांचे फॉल्स पॉझिटिव्ह दूषित होण्यापासून रोखता येईल.
मोठ्या प्रमाणावर चाचणी आयोजित करताना फोरजीनची थेट पीसीआर-यूएनजी प्रणाली वापरण्याची शिफारस केली जाते, जसे की:
प्लांट लीफ डायरेक्ट पीसीआर किट-यूएनजी;
रोपे बियाणे डायरेक्ट पीसीआर किट-यूएनजी;
अॅनिमल टिश्यू डायरेक्ट पीसीआर किट-यूएनजी;
माऊस टेल डायरेक्ट पीसीआर किट-यूएनजी;
झेब्रा फिश डायरेक्ट पीसीआर किट-यूएनजी.
Foregene पासून किटची ही मालिकाकेवळ PCR शोधणे त्वरीत आणि मोठ्या प्रमाणावर करू शकत नाही, परंतु PCR उत्पादनाच्या दूषिततेला प्रभावीपणे प्रतिबंध आणि नियंत्रण देखील करू शकते.
पोस्ट वेळ: मार्च-19-2021
