पीसीआर प्रतिक्रियेचे उत्कृष्ट वैशिष्ट्य म्हणजे त्याची मोठी प्रवर्धन क्षमता आणि अत्यंत उच्च संवेदनशीलता.पीसीआर कार्यप्रदर्शन आणि शोध कार्यक्षमता सुधारण्यासाठी, आम्ही पीसीआर प्रवर्धन क्षमता आणि शोध संवेदनशीलता सुधारण्यासाठी वचनबद्ध आहोत, परंतु डोकेदुखी प्रयोगाच्या प्रक्रियेत आहे.फॉल्स पॉझिटिव्ह अनेकदा आढळतात, आणि नमुना क्रॉस-दूषित किंवा PCR उत्पादनाच्या दूषिततेच्या अगदी कमी प्रमाणात प्रयोगात चुकीचे सकारात्मक परिणाम होऊ शकतात.
पीसीआर उत्पादनाचे पाच प्रकार
पीसीआर दूषित होण्याची अनेक कारणे आहेत, जी ढोबळपणे खालील श्रेणींमध्ये विभागली जाऊ शकतात:
नमुना दूषित होणे मुख्यतः नमुना गोळा करण्यासाठी कंटेनरच्या दूषिततेमुळे होते, किंवा जेव्हा नमुना ठेवला जातो तेव्हा तो सैल सीलिंगमुळे कंटेनरमधून बाहेर पडतो किंवा नमुना कंटेनरच्या बाहेरील बाजूस चिकटलेला असतो, ज्यामुळे क्रॉस-दूषित होते;दूषित नमुने दरम्यान दूषित ठरतो;काही सूक्ष्मजीवांचे नमुने, विशेषत: विषाणू, एरोसोलने पसरू शकतात किंवा एरोसोल तयार करू शकतात, परिणामी परस्पर दूषित होऊ शकतात.
मुख्य कारण म्हणजे पीसीआर अभिकर्मक तयार करताना, नमुना बंदूक, कंटेनर, दुहेरी डिस्टिल्ड वॉटर आणि इतर द्रावण पीसीआर न्यूक्लिक अॅसिड टेम्पलेटद्वारे दूषित होतात.
आण्विक जीवशास्त्र प्रयोगशाळा आणि काही प्रयोगशाळा ज्या सकारात्मक नियंत्रणे म्हणून क्लोन प्लाझमिड्स वापरतात, क्लोन प्लाझमिड दूषित होण्याची समस्या देखील सामान्य आहे.कारण युनिट व्हॉल्यूममध्ये क्लोनिंग प्लाझमिडची सामग्री खूप जास्त आहे आणि शुद्धीकरण प्रक्रियेत अधिक साधने आणि अभिकर्मकांची आवश्यकता आहे आणि जिवंत पेशींच्या मजबूत वाढ आणि पुनरुत्पादन क्षमतेमुळे सजीव पेशींमधील प्लाझमिड दूषित होण्याची दाट शक्यता आहे.
प्रवर्धित उत्पादनांचे दूषित होणे ही पीसीआर प्रतिक्रियांमध्ये सर्वात सामान्य दूषित समस्या आहे.कारण PCR उत्पादनाची कॉपी प्रमाण मोठे आहे (सामान्यत: 1013 प्रती/ml), जे PCR डिटेक्शन कॉपी नंबरच्या मर्यादेपेक्षा खूप जास्त आहे, PCR उत्पादनाच्या दूषिततेच्या अगदी कमी प्रमाणात चुकीचे सकारात्मक परिणाम होऊ शकतात.
एरोसोल प्रदूषण हे पीसीआर उत्पादनांच्या दूषित होण्याचा सर्वात संभाव्य प्रकार आहे आणि त्याकडे दुर्लक्ष करणे देखील सर्वात सोपे आहे.हे द्रव पृष्ठभाग आणि हवा यांच्यातील घर्षणाने तयार होते.सामान्यतः, जेव्हा झाकण उघडले जाते, जेव्हा नमुना आकांक्षा केला जातो किंवा प्रतिक्रिया नळी जोमाने हलवली जाते तेव्हा देखील एरोसोल दूषित होऊ शकते.गणनेनुसार, एरोसोल कणामध्ये 48,000 प्रती असू शकतात, म्हणून त्याद्वारे होणारे प्रदूषण ही एक समस्या आहे जी विशेष लक्ष देण्यास पात्र आहे.
विशेषतः, चाचणी प्रयोगशाळा ठराविक जनुकाची चाचणी घेण्यासाठी प्रायमरच्या समान जोडीचा वापर करतात.कालांतराने, प्रयोगशाळेच्या जागेत मोठ्या प्रमाणात पीसीआर उत्पादन दूषित होईल.एकदा असे दूषित झाले की ते कमी वेळात दूर करणे कठीण असते.
पहिल्या तीन प्रकारच्या प्रदूषणासाठी, आपण टाळण्यासाठी प्रभावी माध्यमांचा वापर करू शकतो, परंतु पीसीआर उत्पादनांमुळे होणारे प्रदूषण रोखणे कठीण आहे, विशेषत: गैर-मानक पीसीआर प्रयोगशाळांच्या बांधकामात.पीसीआर प्रक्रियेत, जेव्हा पिपेटची टीप द्रव चोखते आणि फुंकते आणि पीसीआर ट्यूब कव्हर उघडले जाते, तेव्हा एरोसोल तयार होईल.एरोसोलद्वारे वाहून नेलेले डीएनए रेणू (एक एरोसोल हजारो डीएनए वाहून नेऊ शकतो) काढून टाकणे कठीण आहे कारण ते हवेत तरंगतात.पीसीआर प्रयोगांची पुढील फेरी सुरू झाल्यानंतर, चुकीचे सकारात्मक परिणाम अपरिहार्यपणे होतील.
खालील आकृतीमध्ये दर्शविल्याप्रमाणे, नकारात्मक नियंत्रणाने संबंधित व्याज बँड देखील वाढवले:
पीसीआर प्रदूषण आणि प्रतिबंध या अंकाचा पहिला भाग येथे सादर केला आहे.पुढचा अंक तुमच्यासाठी दुसरा भाग "PCR उत्पादन दूषित होण्यापासून बचाव" घेऊन येईल, त्यामुळे संपर्कात रहा!
पोस्ट वेळ: जुलै-25-2017
