RNA काढण्यासाठी तुम्ही अजूनही Trizol वापरत आहात का?
देवा, मला तुझ्या तब्येतीची काळजी करू नकोस!
ट्रायझोल उपेक्षित होणार आहे, मला सांगू नका की तू अजूनही अंधारात आहेस?

ट्रायझोल अभिकर्मकाचा मुख्य घटक फिनॉल आहे आणि प्रायोगिक ऑपरेशनमध्ये क्लोरोफॉर्मसारखे सेंद्रिय अभिकर्मक देखील जोडले जातात.दीर्घकाळापर्यंत प्रदर्शनामुळे तुमच्या आरोग्याला हानी पोहोचते, विशेषत: त्वचेच्या थेट संपर्कामुळे गंभीर रासायनिक बर्न आणि कायमचे चट्टे होऊ शकतात.

सामान्य परिस्थितीत, प्रयोगशाळेतील भागीदार केवळ स्वतःला पूर्णपणे सशस्त्र करून (लॅब कोट, हातमोजे आणि मास्क घालून) धोके कमी करू शकतात.

आणि माझा तुम्हाला सल्ला आहे: स्रोतापासून हानी टाळण्यासाठी कृपया ट्रायझोल थेट बदला.

1. आरएनए निष्कर्षणाची पहिली पिढी उत्पादन
1987 मध्ये बाहेर या (Trizol reagents)

फायदा:
अधिक संपूर्ण निष्कर्षण

तोटे:
ग्वानिडाइन आयसोथियोसायनेट-फिनॉल-क्लोरोफॉर्म सारख्या विषारी अभिकर्मक आवश्यक आहेत;
त्रासदायक ऑपरेशन;
डीएनए दूषितपणा दूर करण्यासाठी DNase वापरण्याची आवश्यकता आहे

2.आरएनए निष्कर्षणाची दुसरी पिढी उत्पादन
1994 मध्ये बाहेर आले (QIAGEN RNeasy आणि बहुतेक घरगुती उत्पादने)

फायदा:
स्तंभ केंद्रापसारक पद्धत अवलंबली जाते, जी ऑपरेट करणे सोपे आहे;

गैरसोय:
मेदयुक्त मोडतोड काढण्यासाठी अपकेंद्रित्र करणे आवश्यक आहे
डीएनए दूषितपणा दूर करण्यासाठी DNase वापरण्याची आवश्यकता आहे

3.आरएनए निष्कर्षणाची तिसरी पिढी उत्पादन
2005 मध्ये बाहेर येत आहे (QIAGEN RNeasy Plus आणि Fओरीजीनआरएनए शुद्धीकरण मालिका उत्पादने)

फायदा:
एकाच वेळी डीएनए आणि टिश्यू मोडतोड काढून टाकण्यासाठी थेट डीएनए काढणे कॉलम वापरा, वेळ आणि मेहनत वाचवा;
सुरक्षित आणि सोयीस्कर, सहजपणे अशुद्धता काढून टाकण्यासाठी आणि डीएनए दूषित होण्यापासून टाळण्यासाठी फिल्टर कॉलम आणि DNase जोडण्याची आवश्यकता नाही

पहिल्या पिढीतील उत्पादन (ट्रिझोल), द्वितीय-पिढीचे उत्पादन (RNeasy) आणि RNA काढण्याचे तृतीय-पिढीचे उत्पादन (फोरजीन) यांच्यातील ऑपरेशनल फरक पाहू:

आकृतीमधील ऑपरेशन स्पष्ट आहे: तिसऱ्या पिढीच्या उत्पादनाचे स्पष्ट फायदे आहेत

वर्णन करण्यासाठी फक्त तीन शब्द: सोपे!जलद!सुरक्षितता

प्रायोगिक परिणामांचा PK चार्टच्या साठीआरएनए एक्सट्रॅक्शनची पहिली-पिढी, दुसरी-पिढी आणि तिसरी-पिढी उत्पादने:

1. Electrophoretogram

पहिली पिढी (१: ट्रायझोल)
दुसरी पिढी (2:QIAGEN RNeasy)
तिसरी पिढी (3: QIAGEN RNeasy plus, 4: Foregene)

कोणत्या प्रकारचे उत्पादन चांगले आहे, तुम्हाला तुलना करून कळेल
फोरजीन किट वापरून आरएनए काढला
केवळ उच्च एकाग्रताच नाही तर चांगली अखंडता देखील

2.qPCR आलेख (प्रवर्धन वक्र आलेख)

पहिली पिढी (ट्रिझोल)

दुसरी पिढी (आकाश निळाम्हणजेQIAGEN RNeasy-, लालम्हणजेQIAGEN RNeasy +)

तिसरी पिढी (निळा म्हणजे फोरजीन, हिरवा म्हणजे QIAGEN RNeasy प्लस)

(टीप: qPCR आलेखाच्या दुसऱ्या पिढीच्या QIAGEN RNeasy चा अर्थ असा आहे की किट DNase जोडत नाही आणि DNA दूषित होत नाही. म्हणून, CT जास्त आहे आणि परिणाम अचूक नाही; QIAGEN RNeasy + म्हणजे DNase जोडले गेले आहे आणि DNA दूषित झाले आहे, आणि परिणाम अचूक आहे)

इलेक्ट्रोफोरेटोग्राम असो किंवा परिमाणात्मक पीसीआर प्रवर्धन वक्र आलेख असो, फोरजीन उत्पादनांची गुणवत्ता विदेशी आयात केलेल्या उत्पादनांपेक्षा निकृष्ट नसते.