परिचय:

RNA, वैज्ञानिक नाव ribonucleic acid, त्याचे संक्षिप्त रूप RiboNucleic Acid पासून आले आहे, हा न्यूक्लिक अॅसिडचा एक प्रकार आहे जो फॉस्फोडीस्टर बॉण्ड्सद्वारे कमीतकमी डझनभर रिबोन्यूक्लियोटाइड्सना जोडून तयार होतो.

आरएनए एक्सप्लोर करण्याचा आधार प्रदूषणमुक्त एकूण आरएनए काढणे हा आहे आणि आरएनए एक्सप्लोर करण्याचे मूलभूत तत्त्व खालीलप्रमाणे सारांशित केले जाऊ शकते:

1. प्रथम पेशी विस्कळीत करा

2. नंतर मॅक्रोमोलेक्युलर अशुद्धता (प्रथिने, लिपिड, डीएनए इ.) काढून टाका.

3. शेवटी, क्षार आणि सेंद्रिय सॉल्व्हेंट्स काढून टाकताना आणि आरएनए शुद्ध करताना आरएनएचा अवक्षेप होतो.

काढण्याच्या पद्धतीचा भूतकाळ आणि वर्तमान

RNA निष्कर्षण पद्धतीची पहिली पिढी म्हणजे TRIzol पर्जन्य पद्धत (वापरलेल्या अभिकर्मकांमध्ये गुआनिडाइन आयसोथियोसायनेट, फिनॉल, क्लोरोफॉर्म इ.) पिओटर चोम्कझिन्स्की आणि आजी निकोलेटा सॅची नावाच्या आजोबांनी शोध लावला आहे, कारण या शोधामुळे RNA काढणे जलद आणि सोपे झाले, तेव्हापासून आरएनए संशोधन सुरू झाले.

नंतर, आजोबांनी हे पेटंट Invitrogen ला विकले आणि Invitrogen ने ही पद्धत जगासमोर आणली आणि ती मोठ्या प्रमाणावर वापरली जाणारी पद्धत बनली.

नंतर, इन्व्हिट्रोजन थर्मोने विकत घेतले!

प्रातिनिधिक उत्पादन: इनव्हिट्रोजनचे TRIzol अभिकर्मक

तथापि, TRIzol पर्जन्य पद्धतीसाठी अनेक वर्षाव आणि RNA काढणे आवश्यक आहे, आणि वापरलेले अभिकर्मक विषारी असतात आणि ऑपरेट होण्यासाठी बराच वेळ लागतो.

म्हणून, दुसऱ्या पिढीतील स्तंभ-एंझाइम शुद्धीकरण पद्धत अस्तित्वात आली, ज्यामध्ये विशिष्ट न्यूक्लिक अॅसिड शोषण सामग्री म्हणून सिलिका जेल मेम्ब्रेनचा वापर करून इतर अशुद्धता काढून टाकताना नमुन्यातील आरएनएची पुनर्प्राप्ती जास्तीत जास्त केली जाते.

दुसऱ्या पिढीची पद्धत स्थिर कार्यक्षमतेच्या आधारे ऑपरेशन सुलभ करते, जोखीम घटक कमी करते आणि RNA निष्कर्षणाची कार्यक्षमता सुधारते.

प्रतिनिधी उत्पादने: QIAGEN RNeasy आणि बहुतेक घरगुती उत्पादने

तथापि, पहिल्या आणि दुसऱ्या पिढीच्या दोन्ही पद्धतींमध्ये DNA दूषितता काढून टाकण्यासाठी DNase चा वापर करणे आवश्यक आहे, ज्यामुळे त्यानंतरच्या डाउनस्ट्रीम प्रयोगांमध्ये काही गैरसोय होते.अवशिष्ट DNase रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शनची कार्यक्षमता कमी करेल आणि प्रथम-स्ट्रँड cDNA संश्लेषण कमी करेल, ज्यामुळे परिणामांच्या अचूकतेवर परिणाम होईल.

म्हणून, तिसरी पिढी काढण्याची पद्धत दुसऱ्या पिढीच्या आधारावर ऑप्टिमाइझ केली जाते.प्रयोगासाठी कोणतेही एन्झाइम जोडण्याची आवश्यकता नाही आणि आरएनए फक्त दोन स्तंभांसह सहज मिळवता येते.

स्तंभ 1: डीएनए साफ करण्यासाठी DNA-स्वच्छता स्तंभ

स्तंभ 2: RNA-केवळ स्तंभ विशेषतः RNA शोषून घेतो आणि पुनर्प्राप्त करतो

अशा साध्या ऑपरेशनमुळे केवळ वेळेची बचत होत नाही, तर डाउनस्ट्रीम प्रयोगांचे ऑपरेशन देखील सुलभ होते!

प्रतिनिधी उत्पादने: QIAGEN RNeasy Plus आणिफोरजीनआरएनए शुद्धीकरण मालिका उत्पादने

(RNeasy Plus)

(फोरजीनचेप्लांट टोटल आरएनए आयसोलेशन किट)

शांतपणे सांगतो!फोरजीनचे RNA किट वापरण्यास-सुलभ RNase इरेजर देखील सादर करते, जे मानवी शरीरात कोणतेही विषारी पदार्थ न घालता 1 मिनिटात घन पृष्ठभागावरील 400μg RNase पूर्णपणे काढून टाकू शकते!

चित्र1: ऑपरेशनल प्रक्रिया तुलना चार्ट

Foregene ची उत्पादने फक्त दोन गाण्यांमध्ये RNA निष्कर्षण पूर्ण करू शकतात, इतरांना तुमच्या प्रयोगाच्या प्रगतीचा हेवा वाटू देऊ नका!

चित्र2:Eप्रयोगात्मक परिणाम तुलना चार्ट

पहिली पिढी (1: TRIzol)

दुसरी पिढी (2: QIAGEN च्या RNeasy)

तिसरी पिढी (3: QIAGEN's RNeasy plus, 4: Foregene)

चित्र3: qPCR आलेख (प्रवर्धन वक्र आलेख)

पहिली पिढी (हिरव्या म्हणजे TRIzol -, लाल म्हणजे TRIzol +)

दुसरी पिढी (आकाश निळा म्हणजे QIAGEN RNeasy-, लाल म्हणजे QIAGEN RNeasy +)

तिसरी पिढी (निळा म्हणजे QIAGEN RNeasy प्लस, हिरवा म्हणजे Foregene)

(टीप: qPCR आलेख “-” सूचित करतो की DNase जोडले गेले नाही आणि DNA दूषित झाले नाही. म्हणून, CT जास्त आहे आणि परिणाम अचूक नाही; “+” सूचित करतो की DNase जोडला गेला आहे आणि DNA दूषित झाला आहे, परिणाम अचूक आहे)

प्रत्येक तांत्रिक सुधारणा म्हणजे प्रयोगाचे ऑपरेशन अधिक सोप्या आणि अधिक वापरकर्ता-अनुकूल दिशेने विकसित होत आहे.

Foregene चे उद्दिष्ट अधिक वैज्ञानिक संशोधकांना प्रायोगिक वेळ आणि खर्च वाचवणे, उच्च-गुणवत्तेचे प्रायोगिक परिणाम प्राप्त करणे आणि संयुक्तपणे अधिक मौल्यवान वैज्ञानिक संशोधन उपलब्धी निर्माण करण्यात मदत करणे आहे.