लेखक: वांग झियाओयान, झाओ एरीयू

युनिट: जिओझोऊ हॉस्पिटल, डोंगफांग हॉस्पिटल टोंगजी विद्यापीठाशी संलग्न

सध्या, श्वसन रोगजनक न्यूक्लिक अॅसिड शोधण्यासाठी मुख्य नमुना प्रकार म्हणजे घशातील स्वॅब.सामान्यतः वापरल्या जाणार्‍या सॅम्पल प्रिझर्व्हेशन सोल्यूशन्सचे अनेक प्रकार आहेत, त्या सर्वांना वाहतूक आणि साठवणुकीसाठी रेफ्रिजरेटर किंवा गोठविण्याची आवश्यकता आहे;संकलन आणि वाहतूक प्रक्रियेदरम्यान कमी तापमानाची संपूर्ण प्रक्रिया नियंत्रित करणे कठीण आहे आणि नमुना चाचणीपूर्वी गुणवत्ता नियंत्रण सुनिश्चित करणे कठीण आहे.^[१-२].

RNase (RNase) हे एक एंडोन्यूक्लीज आहे जे RNA चे हायड्रोलायझेशन करते, मुख्यत्वे न्यूक्लियोटाइड्समधील फॉस्फोडिएस्टर बंध तोडते.RNase रेणू अतिशय स्थिर आहे, संरचनेत डायसल्फाइड बॉण्ड्स आहेत, आणि त्याच्या क्रियाकलापांना डायव्हॅलेंट केशन्सची उपस्थिती आवश्यक नसते, म्हणून RNase सहजपणे विकृत होत नाही, आणि उच्च तापमान किंवा denaturants वापरल्यानंतरही ते पुनर्निर्मित करणे सोपे आहे.RNases अंतर्जात आणि exogenous मध्ये विभागलेले आहेत.जेव्हा पेशी फुटतात त्याच वेळी अंतर्जात RNases सोडले जाऊ शकतात.म्हणून, अंतर्जात RNases ची भूमिका काढून टाकणे हे RNA काढण्याच्या प्रक्रियेतील एक अतिशय गंभीर पाऊल आहे.एक्सोजेनस RNase मोठ्या प्रमाणावर वितरीत केले जातात.हवा, मानवी त्वचा, केस आणि लाळेमध्ये RNase अस्तित्वात आहेत, जे RNA च्या सहज ऱ्हासाचे महत्त्वाचे कारण आहेत.^[३].

डेटा क्वेरी

CANS-CL02-A009 “आण्विक निदानाच्या क्षेत्रात वैद्यकीय प्रयोगशाळेची गुणवत्ता आणि सक्षमता मान्यता मार्गदर्शक तत्त्वांचा अनुप्रयोग” तांत्रिक आवश्यकतांमध्ये असे प्रस्तावित करते की अर्जानुसार योग्य पाण्याची गुणवत्ता मानके तयार केली जावीत;डिस्पोजेबल हवाबंद कंटेनर:

RNase/वर्गीकरण

(1) RNase A

रिबोन्यूक्लीज A (RNase A), बोवाइन स्वादुपिंडापासून प्राप्त झालेला, एक एंडोरिबोन्यूक्लीज आहे जो विशेषत: RNA वरील पायरीमिडीन अवशेषांच्या 3′ टोकावर हल्ला करू शकतो, जवळच्या न्यूक्लियोटाइड्सद्वारे तयार होणारे सायटोसिन किंवा युरेसिल कापून टाकू शकतो.फॉस्फोडीस्टर बाँड, प्रतिक्रियेचे अंतिम उत्पादन 3′ पायरीमिडीन न्यूक्लियोटाइड आणि शेवटी 3′ पायरीमिडीन न्यूक्लियोटाइड असलेले ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड आहे.

(2) RNase T1

रिबोन्यूक्लीज T1 (RNase T1) हे Aspergillus orjzae पासून घेतले आहे, ते विशेषत: ग्वानिनच्या 3′-टर्मिनल फॉस्फेटवर कार्य करते आणि क्लीव्हेज साइट ग्वानिनच्या 3′ फॉस्फेट आणि लगतच्या 5′ हायड्रॉक्सिलच्या दरम्यान आहे.प्रतिक्रियेचे अंतिम उत्पादन म्हणजे 3′ग्वानाइलिक ऍसिड आणि शेवटी 3′ग्वानिलिक ऍसिड असलेले ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड तुकडे.

(3) RNase H

Ribonuclease H (RNase H) प्रथम वासराच्या थायमस टिश्यूमधून शोधला गेला आणि त्याचे एन्कोडिंग जनुक एस्चेरिचिया कोलीमध्ये क्लोन केले गेले.हे विशेषतः DNA खराब करू शकते: RNA संकरित डुप्लेक्सेसमधील RNA स्ट्रँड्स, परिणामी 3′-OH आणि 5′-मोनोफॉस्फेटसह ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स आणि मोनोन्यूक्लियोटाइड्स बनतात, ते सिंगल- किंवा डबल-स्ट्रँडेड DNA किंवा RNA कमी करू शकत नाहीत.

RNase

कार्य आणि वापर

रिबोन्यूक्लिझ रिबोन्यूक्लीक ऍसिड (RNA) च्या ऱ्हासाला उत्प्रेरित करू शकते आणि कृत्रिमरित्या संश्लेषित केले जाऊ शकते.आघात आणि सांधेदुखीवर उपचार करण्यासाठी औषधी मलम स्थानिक पातळीवर वापरले जाते.अहवालानुसार, रिबोन्यूक्लिझ यजमान सेल चयापचय बदलू शकते, विषाणू संश्लेषण रोखू शकते, विट्रोमध्ये इन्फ्लूएंझा विषाणूचा प्रसार रोखू शकते आणि चिकन भ्रूणांमध्ये लस आणि नागीण व्हायरसची निर्मिती रोखू शकते.180 मिग्रॅ च्या रोजच्या इंट्रामस्क्युलर इंजेक्शनचा क्लिनिकल वापर, महामारी एन्सेफलायटीसच्या उपचारांसाठी फायदेशीर, रिबोन्यूक्लिझ रिबोन्यूक्लिझ ऍसिड (RNA) च्या ऱ्हासाला उत्प्रेरित करू शकते आणि आता कृत्रिमरित्या संश्लेषित केले जाऊ शकते.आघात आणि सांधेदुखीवर उपचार करण्यासाठी औषधी मलम स्थानिक पातळीवर वापरले जाते.अहवालानुसार, रिबोन्यूक्लिझ यजमान सेल चयापचय बदलू शकते, विषाणू संश्लेषण रोखू शकते, विट्रोमध्ये इन्फ्लूएंझा विषाणूचा प्रसार रोखू शकते आणि चिकन भ्रूणांमध्ये लस आणि नागीण व्हायरसची निर्मिती रोखू शकते.एपिडेमिक एन्सेफलायटीसच्या उपचारांसाठी 180 मिग्रॅच्या रोजच्या इंट्रामस्क्युलर इंजेक्शनचा रीबोन्यूक्लीजचा क्लिनिकल वापर फायदेशीर आहे.

RNase

इनहिबिटर व्याख्या

RNase इनहिबिटर युनिटची व्याख्या: 5ng RNase A च्या 50% क्रियाकलापांना रोखण्यासाठी आवश्यक एन्झाइमची मात्रा एक युनिट आहे.

RNase इनहिबिटर कसे कार्य करतात

ग्वानिडाइन आयसोथिओसायनेट:

Guanidine isothiocyanate हे C2H6N4S आण्विक सूत्र असलेले सेंद्रिय संयुग आहे.मुख्यतः जैविक औषध, रासायनिक अभिकर्मक इ. मध्ये वापरले जाते. ग्वानिडाइन आयसोथियोसायनेट हे प्रथिने लायझिंग एजंट आहे आणि ते बहुधा आण्विक डायग्नोस्टिक अभिकर्मकांमध्ये लिसिस सोल्यूशनचे मुख्य घटक म्हणून वापरले जाते.ते ऊतींचे विघटन करू शकते, पेशींची रचना नष्ट करू शकते आणि न्यूक्लिक अॅसिड न्यूक्लियोप्रोटीनपासून वेगळे करू शकते आणि RNase ला मजबूत विकृतीकरण आहे.हे सध्या सर्वात प्रभावी RNase इनहिबिटर आहे.

TRIzol एक नवीन एकूण RNA निष्कर्षण अभिकर्मक आहे जो थेट पेशी किंवा ऊतींमधून एकूण RNA काढू शकतो.त्यात फिनॉल आणि ग्वानिडाइन आयसोथियोसायनेट सारखे पदार्थ असतात, जे पेशींना वेगाने व्यत्यय आणू शकतात आणि पेशींद्वारे सोडलेल्या न्यूक्लीजला प्रतिबंधित करू शकतात.

(तथापि, ग्वानिडाइन आयसोथियोसायनेट प्रयोगशाळेतील संशोधकांच्या आरोग्यासाठी धोकादायक आहे.)

RNasin:

ऍसिड ग्लायकोप्रोटीन उंदराच्या यकृत किंवा मानवी ब्लास्टोडर्ममधून काढले जाते.Rnasin हा RNase चा गैर-स्पर्धात्मक अवरोधक आहे, जो निरनिराळ्या RNase ला त्यांना निष्क्रिय करण्यासाठी बांधू शकतो.

(अधिक तपशील:https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hउच्च तापमान:

उच्च तापमान देखील प्रथिने विकृतीकरणाचे एक सामान्य साधन आहे.

डायथिलपायरोकार्बोनेट (DEPC):

DEPC हा एक मजबूत परंतु अपूर्ण RNase इनहिबिटर आहे, जो RNase सक्रिय गटातील अमीनो ऍसिड इमिडाझोल रिंगच्या संयोगाने प्रथिने नष्ट करण्यासाठी RNase क्रियाकलाप रोखू शकतो.

व्हॅनॅडिल रिबोन्यूक्लिओसाइड कॉम्प्लेक्स:

व्हॅनेडियम ऑक्साईड आयन आणि न्यूक्लिओसाइड्सद्वारे तयार केलेले एक कॉम्प्लेक्स, जे संक्रमण पदार्थांच्या रूपात RNase ला जोडते, जे RNase च्या क्रियाकलापांना जवळजवळ पूर्णपणे रोखू शकते.

इतर:

SDS, युरिया, डायटोमेशिअस अर्थ इत्यादींचा देखील RNase वर विशिष्ट प्रतिबंधात्मक प्रभाव असतो.

तज्ञांची पुनरावलोकने

ली युजी मुख्य तंत्रज्ञ

प्रयोगशाळा विभागाचे संचालक, जिओझोऊ हॉस्पिटल, डोंगफांग हॉस्पिटल टोंगजी विद्यापीठाशी संलग्न

एक्सोजेनस RNase चे जैवविघटन रोखण्यासाठी, RNA काढण्याच्या प्रक्रियेदरम्यान मुखवटे, हातमोजे आणि टोपी घातल्या पाहिजेत आणि वारंवार बदलल्या पाहिजेत.सर्व काचेची भांडी 2 तासांपेक्षा जास्त काळ 200 डिग्री सेल्सिअस तपमानावर सुकवणाऱ्या ओव्हनमध्ये बेक करणे आवश्यक आहे.बेकिंगसाठी वापरल्या जाणार्‍या प्लॅस्टिकसारख्या सामग्रीवर DEPC पाण्याने प्रक्रिया करणे आवश्यक आहे आणि नंतर डिस्टिल्ड वॉटरने धुवावे लागेल.आरएनए काढण्यासाठी, जतन करण्यासाठी आणि ओळखण्यासाठी वापरले जाणारे अभिकर्मक किंवा उपकरणे आरएनएला समर्पित केली जावीत आणि स्वतंत्र आरएनए ऑपरेशन क्षेत्र स्थापित केले जावे.

संदर्भ:

[१] स्मिथ-वॉघन एचसी, बिंक्स एमजे, बीसबार्थ जे, इ.स्थानिक ऑस्ट्रेलियन मुलांमध्ये तीव्र खालच्या श्वसन संक्रमणाच्या प्रारंभाच्या तत्काळ आधी नासोफरीनक्समधील बॅक्टेरिया आणि विषाणू[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[२] चिनी प्रिव्हेंटिव्ह मेडिसिन असोसिएशनची हॉस्पिटल इन्फेक्शन कंट्रोल शाखा.क्लिनिकल मायक्रोबियल नमुने संकलन आणि तपासणीसाठी मार्गदर्शक तत्त्वे [जे].चायनीज जर्नल ऑफ हॉस्पिटल इन्फेक्शन, 2018(20):3192-3200.

[३] “क्लिनिकल टेस्ट टेन थाउजंड का मॉलिक्युलर बायोलॉजी टेस्ट व्हॉल्यूम”