समस्या विश्लेषण मार्गदर्शक

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

कमी उत्पन्न किंवा डीएनए नाही

नमुन्याचा स्त्रोत, नमुन्याचे वय, नमुन्याची साठवण परिस्थिती आणि ऑपरेशन यासह जीनोमिक डीएनएच्या उत्पन्नावर परिणाम करणारे अनेक घटक असतात.

उत्खननादरम्यान जीनोमिक डीएनए मिळू शकला नाही

1. ऊतींचे नमुने अयोग्यरित्या साठवले जातात किंवा जास्त काळ साठवले जातात, परिणामी जीनोमिक डीएनएचा ऱ्हास होतो.

शिफारस: ऊतींचे नमुने द्रव नायट्रोजन किंवा -20 मध्ये साठवा°क;जीनोमिक डीएनए काढण्यासाठी नवीन गोळा केलेले नमुने वापरण्याचा प्रयत्न करा.

2. खूप कमी नमुन्यामुळे संबंधित जीनोमिक डीएनए काढला जाऊ शकत नाही.

सूचना: जे ऊतींचे नमुने बर्याच काळापासून साठवले गेले आहेत किंवा गंभीर जीनोमिक डीएनए ऱ्हास झाला आहे, त्यांच्यासाठी, लक्षणीय जीनोमिक डीएनए काढण्यासाठी ऊतींचे नमुने योग्यरित्या वाढवता येतात.डीएनएच्या गरजेनुसार नमुन्याचे प्रमाण निश्चित केले जाऊ शकते, परंतु ताजे नमुना 100mg पेक्षा जास्त नसावा आणि कोरडा नमुना 30mg पेक्षा जास्त नसावा.

3. नमुना द्रव नायट्रोजनसह ग्राउंड केलेला नाही किंवा द्रव नायट्रोजन नंतर बराच काळ ठेवला जात नाही.

सूचना: डीएनए काढताना, सेलची भिंत तोडण्यासाठी नमुना द्रव नायट्रोजनसह पूर्णपणे जमिनीवर असणे आवश्यक आहे;पीसल्यानंतर, कृपया नमुना पावडर 65 वाजता प्रीहीट केलेल्या PL1 वर हस्तांतरित करा°सी शक्य तितक्या लवकर (एकदा जमिनीची भुकटी वितळली की, जीनोमिक डीएनए वेगाने खराब होण्यास सुरवात होईल).

4. फोरजीन प्रोटीजच्या अयोग्य स्टोरेजमुळे क्रियाकलाप कमी किंवा निष्क्रिय होतात.

शिफारस: फोरजीन प्रोटीजच्या स्टोरेज परिस्थितीची पुष्टी करा किंवा एन्झाईमॅटिक हायड्रोलिसिससाठी नवीन फोरजीन प्रोटीजसह बदला.

5. किट चुकीच्या पद्धतीने साठवले जाते किंवा जास्त काळ साठवले जाते, ज्यामुळे किटमधील काही घटक निकामी होतात.

शिफारस: संबंधित ऑपरेशन्ससाठी नवीन प्लांट जीनोमिक डीएनए एक्सट्रॅक्शन किट खरेदी करा.

6. किटचा अयोग्य वापर.

सूचना: वनस्पती जीनोमिक डीएनए काढण्यासाठी आणि शुद्धीकरणासाठी नमुन्यांना समर्पित प्लांट डीएनए आयसोलेशन किट खरेदी करा.

7. ए न जोडता बफर WBजलयुक्त इथेनॉल

शिफारस: बफर WB मध्ये परिपूर्ण इथेनॉलचे योग्य प्रमाण जोडण्याची खात्री करा.

8. सिलिका झिल्लीवर इल्युएंट योग्यरित्या टिपले गेले नाही.

सूचना: 65 वाजता प्री-हीटेड एल्युएंट जोडा℃सिलिका जेल झिल्लीच्या मध्यभागी ड्रॉपवाइज करा आणि इल्युशन कार्यक्षमता वाढवण्यासाठी खोलीच्या तापमानावर 5 मिनिटे सोडा.

कमी-उत्पन्न जीनोमिक डीएनए मिळविण्यासाठी निष्कर्षण

1. नमुना अयोग्यरित्या संग्रहित केला जातो किंवा जास्त काळ साठवला जातो, परिणामी जीनोमिक डीएनएचा ऱ्हास होतो.

शिफारस: ऊतींचे नमुने -20 वर साठवा℃;जीनोमिक डीएनए काढण्यासाठी नवीन गोळा केलेले ऊतींचे नमुने वापरण्याचा प्रयत्न करा.

2. ऊतींचे नमुने खूप कमी असल्यास, काढलेला जीनोमिक डीएनए कमी असेल.

सूचना: काही वनस्पतींचे नमुने पाण्याने समृद्ध आहेत, जसे की एकपेशीय वनस्पती इत्यादी जलीय वनस्पती, डोस योग्यरित्या वाढविला जाऊ शकतो किंवा ऑपरेशनच्या थोडे आधी पाणी निर्जलीकरण केले जाऊ शकते.

3. नमुने द्रव नायट्रोजनसह पूर्णपणे ग्राउंड केलेले नव्हते किंवा पीसल्यानंतर ते खोलीच्या तपमानावर खूप वेळ सोडले होते.

सूचना: द्रव नायट्रोजन ग्राइंडिंग पुरेसे असणे आवश्यक आहे, आणि नमुना सेल भिंत शक्य तितकी तोडली पाहिजे;पीसल्यानंतर लगेच, नमुना पावडर 65 वर हस्तांतरित केली पाहिजे℃पुढील चरणासाठी प्रीहेटेड बफर PL1.

4. योग्य किट वापरत नाही.

शिफारस: वनस्पती जीनोमिक डीएनए काढण्यासाठी आणि शुद्ध करण्यासाठी समर्पित प्लांट डीएनए आयसोलेशन किट वापरा.

5. फोरजीन प्रोटीजच्या अयोग्य स्टोरेजमुळे क्रियाकलाप कमी किंवा निष्क्रिय होतात.

शिफारस: फोरजीन प्रोटीजच्या स्टोरेज परिस्थितीची पुष्टी करा किंवा एन्झाईमॅटिक हायड्रोलिसिससाठी नवीन फोरजीन प्रोटीजसह बदला.

6. Eluent समस्या

शिफारस: कृपया इल्युशनसाठी बफर ईबी वापरा;ddH वापरत असल्यास₂O किंवा इतर एल्युएंट्स, एल्युएंटचा pH 7.0-8.5 च्या दरम्यान असल्याची खात्री करा.

7. एल्युएंट योग्यरित्या टिपले जात नाही

सूचना: कृपया सिलिका झिल्लीच्या मध्यभागी इल्युशन ड्रॉप घाला आणि इल्युशन कार्यक्षमता वाढवण्यासाठी खोलीच्या तापमानावर 5 मिनिटे सोडा.

8. एल्युएंट व्हॉल्यूम खूप लहान आहे

सूचना: कृपया सूचनांनुसार जीनोमिक डीएनए उत्सर्जनासाठी एल्युएंट वापरा, किमान 100 पेक्षा कमी नाही.μl.

कमी शुद्धतेसह जीनोमिक डीएनए काढला

जीनोमिक डीएनएच्या कमी शुद्धतेमुळे डाउनस्ट्रीम प्रयोगांचा अयशस्वी किंवा खराब परिणाम होईल, जसे की: एंजाइम कापला जाऊ शकत नाही आणि लक्ष्य जनुकाचा तुकडा पीसीआरद्वारे मिळवता येत नाही.

1. विविध प्रथिने दूषित होणे, आरएनए दूषित होणे.

विश्लेषण: स्तंभ धुण्यासाठी बफर पीडब्ल्यूचा वापर केला गेला नाही;बफर PW चा वापर योग्य सेंट्रीफ्यूगेशन वेगाने कॉलम धुण्यासाठी केला गेला नाही.

सूचना: सुपरनॅटंट स्तंभातून जात असताना त्यात पर्जन्यवृष्टी होणार नाही याची खात्री करण्याचा प्रयत्न करा;सूचनांनुसार शुद्धीकरण स्तंभ बफर PW सह धुण्याची खात्री करा आणि ही पायरी वगळली जाऊ शकत नाही.

2. अशुद्धता आयन प्रदूषण.

विश्लेषण: बफर WB वॉश कॉलम वगळण्यात आला किंवा फक्त एकदाच धुतला गेला, परिणामी अवशिष्ट आयनिक दूषित झाले.

शिफारस: शक्य तितक्या अवशिष्ट आयन काढून टाकण्यासाठी सूचनांनुसार बफर WB सह दोनदा धुण्याची खात्री करा.

3. RNase दूषित होणे.

विश्लेषण: Exogenous RNase बफरमध्ये जोडले जाते;बफर PW मधील चुकीच्या वॉशिंग ऑपरेशनचा परिणाम अवशिष्ट RNase मध्ये होईल आणि डाउनस्ट्रीम RNA प्रायोगिक ऑपरेशन्सवर परिणाम होईल, जसे की इन विट्रो ट्रान्सक्रिप्शन.

सूचना: फोरजीन मालिका न्यूक्लिक अॅसिड एक्स्ट्रॅक्शन किट अतिरिक्त RNase शिवाय RNA काढू शकतात आणि प्लांट DNA अलगाव किटमधील सर्व अभिकर्मकांना RNase ची गरज नाही;सूचनांनुसार शुद्धीकरण स्तंभ बफर PW सह धुण्याची खात्री करा आणि ही पायरी वगळली जाऊ शकत नाही.

4. इथेनॉल अवशेष.

विश्लेषण: बफर WB सह शुद्धीकरण स्तंभ धुल्यानंतर, रिक्त ट्यूब सेंट्रीफ्यूगेशन केले गेले नाही.

शिफारस: योग्य रिकाम्या ट्यूब सेंट्रीफ्यूगेशनसाठी सूचनांचे अनुसरण करा.

माहिती पत्रिका:

प्लांट डीएनए आयसोलेशन किट इंस्ट्रक्शन मॅन्युअल