डिटेक्शन टेक्नॉलॉजीच्या इतिहासातील अनेक क्रांतिकारी आविष्कार हे प्रतिजन-अँटीबॉडी विशिष्ट बंधन, पीसीआर तंत्रज्ञान आणि अनुक्रम तंत्रज्ञानाच्या तत्त्वावर आधारित इम्युनोलाबेलिंग तंत्रज्ञान आहेत.आज आपण पीसीआर तंत्रज्ञानाबद्दल बोलू.पीसीआर तंत्रज्ञानाच्या उत्क्रांतीनुसार, लोक पीसीआर तंत्रज्ञानाला तीन पिढ्यांमध्ये विभाजित करतात: सामान्य पीसीआर तंत्रज्ञान, रिअल-टाइम फ्लोरोसेंट परिमाणात्मक पीसीआर तंत्रज्ञान आणि डिजिटल पीसीआर तंत्रज्ञान.
Common PCR तंत्र
कॅरी मुलिस (1944.12.28-2019.8.7)
कॅरी मुलिस यांनी 1983 मध्ये पॉलिमरेझ चेन रिएक्शन (पॉलिमरेझ चेन रिएक्शन , पीसीआर) चा शोध लावला. असे म्हटले जाते की जेव्हा तो त्याच्या मैत्रिणीला गाडी चालवत होता तेव्हा त्याला अचानक प्रेरणा मिळाली आणि पीसीआरच्या तत्त्वाचा (ड्रायव्हिंगच्या फायद्यांवर) विचार झाला.कॅरी मुलिस यांना 1993 मध्ये रसायनशास्त्रातील नोबेल पारितोषिक प्रदान करण्यात आले. न्यूयॉर्क टाइम्सने टिप्पणी केली: "अत्यंत मूळ आणि महत्त्वपूर्ण, जीवशास्त्राला पीसीआरपूर्व आणि पीसीआर-नंतरच्या युगांमध्ये विभाजित करते.
PCR चे तत्त्व: DNA पॉलिमरेझच्या उत्प्रेरणा अंतर्गत, मदर स्ट्रँड DNA टेम्पलेट म्हणून वापरला जातो आणि विशिष्ट प्राइमर विस्ताराचा प्रारंभ बिंदू म्हणून वापरला जातो, आणि मदर स्ट्रँड टेम्पलेट DNA ला पूरक असलेली कन्या स्ट्रँड डीएनए विट्रोमध्ये विकृतीकरण, अॅनिलिंग, विस्तार आणि इतर चरणांद्वारे कॉपी केली जाते.हे व्हिट्रोमधील डीएनए संश्लेषण प्रवर्धक तंत्रज्ञान आहे, जे विट्रोमधील कोणत्याही लक्ष्यित डीएनएला वेगाने आणि विशेषत: वाढवू शकते.
सामान्य पीसीआरचे फायदे
1.क्लासिक पद्धत, संपूर्ण आंतरराष्ट्रीय आणि देशांतर्गत मानके
2.इन्स्ट्रुमेंट अभिकर्मकांची कमी किंमत
3.इतर आण्विक जीवशास्त्र प्रयोगांसाठी पीसीआर उत्पादने पुनर्प्राप्त केली जाऊ शकतात
शिफारस केलेले फोरजीन पीसीआर मशीन: https://www.foreivd.com/foreamp-sn-695-series-thermal-cycler-96-wells-pcr-machine-product/
संबंधित उत्पादने: https://www.foreivd.com/pcr-herotm-with-dye-product/
सामान्य पीसीआरचे तोटे
1.प्रदूषित करणे सोपे
2.त्रासदायक ऑपरेशन
3.केवळ गुणात्मक विश्लेषण
4.मध्यम संवेदनशीलता
5.नॉन-विशिष्ट प्रवर्धन आहे आणि जेव्हा विशिष्ट नसलेला बँड लक्ष्य बँड सारखाच असतो, तेव्हा तो ओळखला जाऊ शकत नाही
Cएपिलरी इलेक्ट्रोफोरेसीस-आधारित पीसीआर
सामान्य पीसीआरच्या कमतरतेच्या प्रतिसादात, काही उत्पादकांनी केशिका इलेक्ट्रोफोरेसीसच्या तत्त्वावर आधारित उपकरणे सादर केली आहेत.केशिकामध्ये पीसीआर प्रवर्धन पूर्ण झाल्यानंतर इलेक्ट्रोफोरेसीसची पायरी.संवेदनशीलता जास्त आहे, आणि अनेक पायांमधील फरक ओळखला जाऊ शकतो आणि प्रवर्धन MAERKER द्वारे मोजले जाऊ शकते.उत्पादन सामग्री.गैरसोय असा आहे की पीसीआर उत्पादन अद्याप उघडणे आणि इन्स्ट्रुमेंटमध्ये ठेवणे आवश्यक आहे आणि तरीही दूषित होण्याचा मोठा धोका आहे.
CएपिलरीEलेक्ट्रोफोरेसीस
2. रिअल-टाइम फ्लोरोसेंट परिमाणवाचक पीसीआर (परिमाणात्मक रिअल-टाइम पीसीआर, क्यूपीसीआर) तंत्रज्ञानफ्लोरोसेंट परिमाणात्मक पीसीआर, ज्याला रिअल-टाइम पीसीआर देखील म्हणतात, हे PE (पर्किन एल्मर) द्वारे 1995 मध्ये विकसित केलेले एक नवीन न्यूक्लिक अॅसिड परिमाणात्मक तंत्रज्ञान आहे. फ्लोरोसेंट परिमाणात्मक पीसीआरचा विकास इतिहास हा ABI, रोचे आणि बायो-आयआर सारख्या दिग्गजांच्या आत्म्याला चालना देणारा संघर्षांचा इतिहास आहे.तुम्हाला स्वारस्य असल्यास, तुम्ही ते तपासू शकता.हे तंत्र सध्या सर्वात परिपक्व आणि मोठ्या प्रमाणावर वापरले जाणारे अर्ध-परिमाणात्मक पीसीआर तंत्र आहे.
शिफारस केलेले qPCR मशीन:https://www.foreivd.com/mini-real-time-pcr-system-forequant-sf2sf4-product/
फ्लोरोसेंट डाई पद्धत (SYBR ग्रीन I):SYBR ग्रीन I हा परिमाणात्मक PCR साठी सर्वात सामान्यपणे वापरला जाणारा DNA-बाइंडिंग डाई आहे, जो विशेषत: दुहेरी-असरलेल्या DNA ला जोडतो.मुक्त स्थितीत, SYBR ग्रीन कमकुवत फ्लूरोसेन्स उत्सर्जित करते, परंतु एकदा दुहेरी-असरलेल्या DNA ला बांधले गेले की, त्याची प्रतिदीप्तता 1000-पट वाढते.म्हणून, प्रतिक्रियेद्वारे उत्सर्जित होणारा एकूण फ्लोरोसेंट सिग्नल सध्याच्या दुहेरी-असरलेल्या DNA च्या प्रमाणात आहे आणि वाढीव उत्पादनाच्या वाढीसह वाढेल.डाई विशेषत: दुहेरी अडकलेल्या DNA ला बांधत असल्याने, चुकीचे सकारात्मक परिणाम निर्माण होऊ शकतात.
संबंधित उत्पादने: https://www.foreivd.com/real-time-pcr-easytm-sybr-green-i-kit-product/
फ्लोरोसेंट प्रोब पद्धत (ताकमान तंत्रज्ञान): दरम्यानPCR प्रवर्धन, एक विशिष्ट फ्लोरोसेंट प्रोब एकाच वेळी प्राइमर्सच्या जोडीप्रमाणे जोडला जातो.प्रोब एक रेखीय ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड आहे, ज्याच्या दोन्ही टोकांना अनुक्रमे फ्लोरोसेंट रिपोर्टर ग्रुप आणि फ्लोरोसेंट क्वेन्चर ग्रुप आहे.जेव्हा प्रोब अखंड असतो, तेव्हा रिपोर्टर ग्रुपद्वारे उत्सर्जित होणारा फ्लोरोसेंट सिग्नल क्वेन्चर ग्रुपद्वारे शोषला जातो आणि तपासण्यासाठी कोणताही फ्लोरोसेंट सिग्नल नसतो;पीसीआर अॅम्प्लीफिकेशन (विस्तार टप्प्यात) दरम्यान, Taq एन्झाइमची 5'-3' डायसर क्रिया पचन करेल आणि प्रोब खराब करेल, ज्यामुळे रिपोर्टर फ्लोरोसेंट ग्रुप आणि क्वेन्चर फ्लूरोसंट ग्रुप वेगळे केले जातील, ज्यामुळे फ्लूरोसेन्स मॉनिटरिंग सिस्टम फ्लोरोसेंट सिग्नल प्राप्त करू शकेल, म्हणजेच, प्रत्येक वेळी एमओएलए फॉर्म्युलेसेंट फ्लूरोसेंट फॉर्म्युलेशन आहे. फ्लोरोसेंट सिग्नल जमा करणे आणि पीसीआर उत्पादनांच्या निर्मितीचे संपूर्ण सिंक्रोनाइझेशन izes.ताकमान प्रोब पद्धत ही क्लिनिकल डिटेक्शनमध्ये सर्वात सामान्यपणे वापरली जाणारी शोध पद्धत आहे.
संबंधित उत्पादने: https://www.foreivd.com/quickeasy%e1%b5%80%e1%b4%b9-real-time-pcr-kit-taqman-product/
qPCR चे फायदे
1.पद्धत परिपक्व आहे आणि सहाय्यक उपकरणे आणि अभिकर्मक पूर्ण आहेत
2.अभिकर्मकांची मध्यम किंमत
3.वापरण्यास सोप
4.उच्च शोध संवेदनशीलता आणि विशिष्टता
qPCR चे तोटे
लक्ष्य जनुकाच्या उत्परिवर्तनामुळे शोध चुकतो.
कमी-सांद्रता टेम्पलेटचा शोध परिणाम निर्धारित केला जाऊ शकत नाही.
परिमाणवाचक शोधासाठी मानक वक्र वापरताना मोठी त्रुटी आहे.
3. डिजिटल पीसीआर (डिजिटल पीसीआर, डीपीसीआर) तंत्रज्ञान
डिजिटल पीसीआर हे न्यूक्लिक अॅसिड रेणूंचे परिपूर्ण प्रमाणीकरण करण्याचे तंत्र आहे.qPCR च्या तुलनेत, डिजिटल PCR थेट DNA/RNA रेणूंची संख्या वाचू शकतो, जे सुरुवातीच्या नमुन्यातील न्यूक्लिक अॅसिड रेणूंचे परिपूर्ण परिमाण आहे.1999 मध्ये, बर्ट वोगेल्स्टीन आणि केनेथ डब्ल्यू. किन-झलर यांनी औपचारिकपणे dPCR ची संकल्पना मांडली.
2006 मध्ये, Fluidigm हे व्यावसायिक चिप-आधारित dPCR इन्स्ट्रुमेंट तयार करणारे पहिले होते.2009 मध्ये, Life Technologies ने OpenArray आणि QuantStudio 12K Flex dPCR प्रणाली लाँच केली.2013 मध्ये, लाइफ टेक्नॉलॉजीजने QuantStudio 3DdPCR प्रणाली लाँच केली, जी 20,000 वैयक्तिक पेशींना समान रीतीने नमुने वितरित करण्यासाठी उच्च-घनता नॅनोस्केल मायक्रोफ्लुइडिक चिप तंत्रज्ञान वापरते.प्रतिक्रिया मध्ये चांगले.
2011 मध्ये, Bio-Rad ने ड्रॉपलेट-आधारित QX100 dPCR इन्स्ट्रुमेंट लाँच केले, जे 20,000 ड्रॉपलेट-वॉटर-इन-ऑइलमध्ये नमुना समान रीतीने वितरित करण्यासाठी वॉटर-इन-ऑइल तंत्रज्ञान वापरते आणि थेंबांचे विश्लेषण करण्यासाठी ड्रॉपलेट विश्लेषक वापरते.2012 मध्ये, RainDance ने प्रत्येक मानक प्रतिक्रिया प्रणालीला 1 दशलक्ष ते 10 दशलक्ष पिकोलिटर-स्तरीय सूक्ष्म-थेंब असलेल्या प्रतिक्रिया इमल्शनमध्ये विभाजित करण्यासाठी, उच्च-दाब वायूद्वारे चालवलेले RainDrop dPCR इन्स्ट्रुमेंट लाँच केले.
आतापर्यंत, डिजिटल पीसीआरने चिप प्रकार आणि ड्रॉपलेट प्रकार असे दोन मोठे गट तयार केले आहेत.डिजिटल पीसीआर कोणत्याही प्रकारचा असला तरीही, त्याची मुख्य तत्त्वे सौम्य करणे, एंडपॉइंट पीसीआर आणि पॉसॉन वितरण मर्यादित आहेत.न्यूक्लिक अॅसिड टेम्पलेट्स असलेली मानक PCR प्रतिक्रिया प्रणाली हजारो PCR प्रतिक्रियांमध्ये समान रीतीने विभागली जाते, जी चिप्स किंवा मायक्रोड्रॉप्लेट्समध्ये वितरीत केली जाते, जेणेकरून प्रत्येक प्रतिक्रियेमध्ये शक्य तितका टेम्प्लेट रेणू असतो आणि एकल-रेणू टेम्पलेट PCR प्रतिक्रिया केली जाते.फ्लूरोसेन्स वाचून सिग्नलची उपस्थिती किंवा अनुपस्थिती मोजली जाते आणि सांख्यिकीय पॉसॉन वितरणाच्या कॅलिब्रेशननंतर परिपूर्ण प्रमाणीकरण केले जाते.
मी वापरलेल्या अनेक डिजिटल पीसीआर प्लॅटफॉर्मची खालील वैशिष्ट्ये आहेत:
1. बायो-रॅड QX200 ड्रॉपलेट डिजिटल पीसीआर बायो-रॅडQX200 हे एक अतिशय उत्कृष्ट डिजिटल PCR प्लॅटफॉर्म आहे, मूलभूत शोध प्रक्रिया: 20,000 नमुने ड्रॉपलेट जनरेटरद्वारे व्युत्पन्न केले जातात वॉटर-इन-ऑइल मायक्रो-ड्रॉप्लेट्स एका सामान्य PCR मशीनवर वाढवले जातात आणि शेवटी प्रत्येक सूक्ष्म-थेंबाचा फ्लोरोसेन्स सिग्नल मायक्रो-ड्रॉप्लेट रीडरद्वारे वाचला जातो.ऑपरेशन अधिक क्लिष्ट आहे, आणि प्रदूषणाचा धोका मध्यम आहे.
Xinyi TD1 मायक्रो-ड्रॉपलेट डिजिटल पीसीआरXinyi TD1 हे घरगुती डिजिटल PCR प्लॅटफॉर्म आहे, मूलभूत शोध प्रक्रिया: ड्रॉपलेट जनरेटरद्वारे 30,000-50,000 वॉटर-इन-ऑइल थेंब तयार करा, सामान्य PCR इन्स्ट्रुमेंटवर वाढवा आणि शेवटी पास करा ड्रॉपलेट रीडर प्रत्येक थेंबाचा फ्लोरोसेंट सिग्नल वाचतो.या प्लॅटफॉर्ममध्ये ड्रॉपलेट निर्मिती आणि वाचन दोन्ही दूषित होण्याच्या कमी जोखमीसह समर्पित चिपमध्ये केले जातात.
स्टिल्ला नायका मायक्रो-ड्रॉपलेट चिप डिजिटल पीसीआरSTILLA Naica हे तुलनेने नवीन डिजिटल PCR प्लॅटफॉर्म आहे.मूलभूत शोध प्रक्रिया अशी आहे: चिपमध्ये प्रतिक्रिया सोल्यूशन जोडा, चिप मायक्रो-ड्रॉपलेट जनरेशन आणि अॅम्प्लीफिकेशन सिस्टममध्ये टाका आणि 30,000 सूक्ष्म-थेंब तयार करा.चिपवर पसरते आणि चिपवर पीसीआर प्रवर्धन पूर्ण होते.मग अॅम्प्लीफाईड चिप मायक्रो-ड्रॉप्लेट रीडिंग अॅनालिसिस सिस्टममध्ये हस्तांतरित केली जाते आणि फ्लोरोसेंट सिग्नल चित्रे घेऊन वाचले जाते.संपूर्ण प्रक्रिया बंद चिपमध्ये होत असल्याने, दूषित होण्याचा धोका कमी आहे.
4. थर्मोफिशर क्वांटस्टुडिओ 3D चिप डिजिटल पीसीआर
ThermoFisher QuantStudio 3D हे आणखी एक क्लासिक चिप-आधारित डिजिटल पीसीआर प्लॅटफॉर्म आहे.त्याची मूलभूत शोध प्रक्रिया अशी आहे: स्प्रेडरमध्ये प्रतिक्रिया द्रावण जोडा आणि स्प्रेडरद्वारे 20,000 मायक्रोवेल्ससह चिपवर समान रीतीने प्रतिक्रिया द्रावण पसरवा., प्रवर्धित करण्यासाठी पीसीआर मशीनवर चिप ठेवा आणि शेवटी रीडरमध्ये चिप घाला आणि फ्लोरोसेंट सिग्नल वाचण्यासाठी एक फोटो घ्या.ऑपरेशन तुलनेने क्लिष्ट आहे, आणि संपूर्ण प्रक्रिया बंद चिपमध्ये केली जाते आणि दूषित होण्याचा धोका कमी असतो.
5. JN MEDSYS क्लॅरिटी चिप डिजिटल पीसीआर
JN MEDSYS क्लॅरिटी हे तुलनेने नवीन चिप-प्रकारचे डिजिटल पीसीआर प्लॅटफॉर्म आहे.त्याची मूलभूत शोध प्रक्रिया अशी आहे: ऍप्लिकेटरमध्ये प्रतिक्रिया द्रावण जोडा आणि ऍप्लिकेटरद्वारे PCR ट्यूबमध्ये निश्चित केलेल्या 10,000 PCR ट्यूबवर प्रतिक्रिया द्रावण समान रीतीने पसरवा.मायक्रोपोरस चिपवर, प्रतिक्रिया द्रावण केशिका क्रियेद्वारे चिपमध्ये प्रवेश करते, आणि चिपसह पीसीआर ट्यूब प्रवर्धनासाठी पीसीआर मशीनवर ठेवली जाते आणि शेवटी फोटो काढून फ्लोरोसेंट सिग्नल वाचण्यासाठी चिप रीडरमध्ये टाकली जाते.ऑपरेशन अधिक क्लिष्ट आहे.दूषित होण्याचा धोका कमी आहे.
प्रत्येक डिजिटल पीसीआर प्लॅटफॉर्मचे पॅरामीटर्स खालीलप्रमाणे सारांशित केले आहेत:
डिजिटल पीसीआर प्लॅटफॉर्मचे मूल्यांकन निर्देशक आहेत: विभाजित युनिट्सची संख्या, फ्लोरोसेंट चॅनेलची संख्या, ऑपरेशनची जटिलता आणि दूषित होण्याचा धोका.परंतु सर्वात महत्वाची गोष्ट म्हणजे शोध अचूकता.डिजिटल पीसीआर प्लॅटफॉर्मचे मूल्यमापन करण्याचा एक मार्ग म्हणजे एकमेकांची पडताळणी करण्यासाठी एकाधिक डिजिटल पीसीआर प्लॅटफॉर्म वापरणे आणि दुसरा मार्ग म्हणजे अचूक मूल्यांसह मानक पदार्थ वापरणे.
डीपीसीआरचे फायदे
1.परिपूर्ण परिमाण साध्य करणे
2.उच्च संवेदनशीलता आणि विशिष्टता
3.कमी प्रतीचे नमुने शोधू शकतात
डीपीसीआरचे तोटे1. महागडी उपकरणे आणि अभिकर्मक 2. गुंतागुंतीचे ऑपरेशन आणि दीर्घ शोध वेळ 3. अरुंद शोध श्रेणी
सध्या, पीसीआर तंत्रज्ञानाच्या तीन पिढ्यांचे स्वतःचे फायदे आणि तोटे आहेत आणि प्रत्येकाची स्वतःची अनुप्रयोग फील्ड आहेत आणि एक पिढी दुसरीची जागा घेते असा संबंध नाही.तंत्रज्ञानाच्या सततच्या प्रगतीने पीसीआर तंत्रज्ञानामध्ये नवीन चैतन्य इंजेक्ट केले आहे, ज्यामुळे ते एकामागून एक अनुप्रयोगाची दिशा अनलॉक करण्यास सक्षम करते, ज्यामुळे न्यूक्लिक अॅसिड शोधणे अधिक सोयीस्कर आणि अचूक होते.
स्रोत: डॉ. युआन तुम्हाला चाचणीसाठी घेऊन जातात
शिफारस केलेली उत्पादने:
पोस्ट वेळ: नोव्हेंबर-18-2022
