प:भाऊ, रिव्हर्स ट्रान्सक्रिप्शन पूर्ण झाले आणि शेवटी शेवटची पायरी - फ्लोरोसेंट परिमाणात्मक पीसीआर!अहो, भाऊ, रिअल-टाइम क्वांटिटेटिव्ह पीसीआर म्हणजे काय?
मी: पीसीआर तुम्हाला नेहमी माहित आहे, बरोबर?
W:तुम्हाला माहिती आहे, PCR ही पॉलिमरेझ चेन रिअॅक्शन आहे आणि हे DNA वाढवणारे तंत्रज्ञान आहे!
M:हे जवळजवळ आहे... विशिष्ट प्राइमर्सद्वारे लक्ष्य क्रम दहा लाखांपेक्षा जास्त वेळा वाढवणे ही एक तांत्रिक पद्धत आहे, परंतु हे केवळ लक्ष्य क्रमाची उपस्थिती किंवा अनुपस्थिती दर्शवते आणि प्रारंभिक टेम्पलेटचे प्रमाण निर्धारित करू शकत नाही.फ्लूरोसेन्स क्वांटिटेटिव्ह पीसीआर ही समस्या सोडवण्यासाठी विकसित केलेली तांत्रिक पद्धत आहे.रिअल टाइम पीसीआर आणि क्वांटिटी पीसीआर (क्यूपीसीआर) सामान्यतः याचा संदर्भ घेतात.
डब्ल्यू:सामान्य पीसीआर मधील फरक फ्लोरोसेन्स क्वांटिफिकेशनमध्ये आहे?
M:होय, म्हणजेच, प्रत्येक पीसीआर सायकलच्या विस्ताराच्या टप्प्यात, फ्लूरोसेन्स सिग्नलची तीव्रता शोधली जाते आणि सिग्नलच्या तीव्रतेच्या बदलानुसार प्रारंभिक टेम्पलेट रक्कम मोजली जाऊ शकते.
डब्ल्यू: हे खूप क्लिष्ट वाटते!हे मला स्वतःहून मोजावे लागेल का?
M:यासाठी तुम्हाला हळूहळू शिकण्याची गरज आहे, तत्त्व समजून घेण्यात सक्षम असणे चांगले.आता तुम्ही प्रथम CT मूल्यावर लक्ष केंद्रित करू शकता, जो तुलनेने अंतर्ज्ञानी प्रायोगिक डेटा आहे आणि त्याचा आकार प्रारंभिक टेम्पलेट रकमेच्या आकाराशी संबंधित आहे.प्रवर्धन वक्र आणि वितळणारे वक्र असे आलेख देखील आहेत.तुमचा प्रयोग यशस्वी झाला की नाही यावर त्यांचे अंतिम म्हणणे असते.
W: अरे, भाऊ.मग मी qPCR चा प्रयोग करणार आहे!
एम: अभिकर्मक क्षेत्रामध्ये टेम्पलेट्स न जोडण्याकडे विशेष लक्ष द्या, अन्यथा तुमचे न वापरलेले मिश्रण सहजपणे दूषित होईल!
डब्ल्यू: समजले!

रिअल टाइम PCR Easyᵀᴹ-SYBR ग्रीन I किट

उच्च कार्यक्षमता, अधिक विशिष्टता
उच्च संवेदनशीलता, चांगली सुसंगतता