मधील संभाव्य समस्यांचे खालील विश्लेषणबुक्कलघासणे/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

शुद्धीकरण स्तंभ अडकलेला आहे

या किटमध्ये, जीनोमिक डीएनए एक्सट्रॅक्शन ऑपरेशनमध्ये, शुद्धिकरण स्तंभ सेंट्रीफ्यूगेशन स्टेपशिवाय नमुना एंजाइमॅटिक लिसिस मिश्रणावर थेट शोषला जातो आणि अपूर्ण एन्झाइमायझेशन आणि नमुन्याच्या उच्च चिकटपणामुळे शुद्धीकरण स्तंभ अवरोधित केला जाऊ शकतो.

खालील संभाव्य कारणे खालीलप्रमाणे आहेत.

1. ऊतींचे नमुने अपूर्ण एंजाइमॅटिक पचन.

शिफारस: फोरजीन प्रोटीजच्या नमुना प्रक्रियेची वेळ योग्यरित्या वाढवता येऊ शकते किंवा 12,000 rpm (~13,400) वर सेंट्रीफ्यूगेशन नंतर सुपरनॅटंट घेतले जाऊ शकते× g) 5 मिनिटांसाठी.

2. ऊतींचे नमुने किंवा मोठ्या ऊतींचा अति वापर.

शिफारस: 1 पेक्षा जास्त न करणे चांगले आहेबुक्कल नमुना मध्ये घासणे;नमुना खूप मोठा असल्यास, त्यानुसार बफर ST1, Foregene Protease, buffer ST2 चा डोस वाढवा.

3. नमुना चिकटपणा खूप जास्त आहे.

शिफारस: जीनोमिक डीएनए काढण्यापूर्वी नमुने 10 मिमी ट्रिस-एचसीएलने योग्यरित्या पातळ केले जाऊ शकतात.

4. रक्त कार्डाचे तुकडे चोखले गेले आहेत.

शिफारस: ब्लड स्पॉट (FTA कार्ड) जीनोमिक एक्सट्रॅक्शनच्या चरण 6 चा क्षणिक सेंट्रीफ्यूगेशन वेळ योग्यरित्या वाढविला जाऊ शकतो.

कमी उत्पन्न किंवा डीएनए नाही

जीनोमिक डीएनए उत्पन्नावर परिणाम करणारे अनेक घटक असतात ज्यात नमुना मूळ, नमुना साठवण परिस्थिती, नमुना तयार करणे, हाताळणी इ.

उत्खननादरम्यान जीनोमिक डीएनए मिळू शकत नाही

संभाव्य कारणे खालीलप्रमाणे आहेत:

1. नमुन्यांची अयोग्य जतन किंवा जास्त काळ साठवणूक केल्याने जीनोमिक डीएनए ऱ्हास होतो.

शिफारस: ओरल स्वॅब्सचे नमुने शक्यतो ताजे केले पाहिजेत आणि जीनोमिक डीएनए एक्सट्रॅक्शन ऑपरेशन्ससाठी संरक्षित स्वॅब वापरणे उचित नाही;रक्ताच्या डागांच्या नमुन्यांनी याची खात्री केली पाहिजे की गुणवत्ता योग्य आहे आणि साठवण वेळ फार मोठा नसावा.

2. फारच कमी टिश्यू वापरामुळे संबंधित जीनोमिक डीएनए काढता येत नाही.

शिफारस: अनुसरण कराबुक्काl ऑपरेशन मार्गदर्शकामध्ये स्वॅब सॅम्पलिंग सूचना, आणि शक्य तितक्या वेळा पुसून टाका जेणेकरुन जीनोमिक डीएनए काढण्यासाठी पुरेशा पेशी तोंडी स्वॅबला जोडल्या जाऊ शकतील;रक्त स्पॉट नमुना काढण्यासाठी, रक्त स्पॉट कटिंग क्षेत्र योग्यरित्या वाढविले जाऊ शकते.

3. फोरेजीन प्रोटीज अयोग्यरित्या संरक्षित आहे, परिणामी त्याची क्रिया किंवा निष्क्रियता कमी होते.

शिफारस: च्या स्टोरेज अटींची पुष्टी कराएफoregen Protease किंवा enzymatic प्रतिक्रिया साठी एक नवीन Foregene Protease सह बदला.

4. किटचे अयोग्य संरक्षण किंवा स्टोरेज वेळ खूप मोठा आहे, परिणामी किटमधील काही घटक निकामी होतात.

शिफारस: नवीन खरेदी कराबुक्कल स्वॅब डीएनएअलगीकरण संबंधित प्रक्रियेसाठी किट.

5. बफर WB परिपूर्ण इथेनॉल जोडत नाही.

शिफारस: बफर WB परिपूर्ण इथेनॉलची योग्य मात्रा जोडते याची पुष्टी करा.

6. सिलिकॉन फिल्ममध्ये एल्युएंट योग्यरित्या जोडलेले नाही.

शिफारस: 65 जोडा°Cप्री-वॉर्म केलेले एल्युएंट सिलिकॉन झिल्लीच्या मध्यभागी खाली येते आणि इल्युशन कार्यक्षमता वाढवण्यासाठी खोलीच्या तापमानाला 5 मिनिटे सोडा.

Low-उत्पन्न जीनोमिक डीएनए वेगळे

खालील संभाव्य कारणे खालीलप्रमाणे आहेत.

1. नमुन्यांची अयोग्य जतन किंवा जास्त काळ साठवणूक केल्याने जीनोमिक डीएनए ऱ्हास होतो.

शिफारस: ओरल स्वॅब्स प्राधान्याने ताजे नमुने घेतले जातात आणि जतन केलेल्या स्वॅबचा वापर जीनोमिक डीएनए काढण्यासाठी केला जाऊ नये.

2. ऊतींच्या नमुन्याचे प्रमाण खूप कमी असल्यास, काढलेल्या जीनोमिक डीएनए सामग्री कमी असेल.

शिफारस: ऑपरेटिंग गाइडमधील ओरल स्वॅब सॅम्पलिंग सूचनांचे पालन करा, शक्य तितक्या वेळा पुसून टाका जेणेकरुन जीनोमिक डीएनए काढण्यासाठी पुरेशा पेशी ओरल स्वॅबला जोडल्या जाऊ शकतील.

3. फोरेजीन प्रोटीज अयोग्यरित्या संरक्षित आहे, परिणामी त्याची क्रिया किंवा निष्क्रियता कमी होते.

शिफारस: च्या स्टोरेज अटींची पुष्टी कराthe Foregene Protease किंवा नवीन सह बदला एंजाइमॅटिक प्रतिक्रियासाठी फोरजीन प्रोटीज.

4. Eluent समस्या.

शिफारस: इल्युशनसाठी बफर ईबी वापरा;ddH वापरत असल्यास₂O किंवा इतर एल्युएंट, इल्युएटचा pH 7.0-8.5 च्या दरम्यान असल्याची पुष्टी करा.

5. इल्युएट योग्यरित्या ड्रॉपवाइज जोडलेले नाही.

शिफारस: सिलिकॉन झिल्लीच्या मध्यभागी एल्युएंट थेंब घाला आणि इल्युशन कार्यक्षमता वाढवण्यासाठी खोलीच्या तपमानावर 5 मिनिटे सोडा.

6. इल्युशन द्रव खूप कमी जमा होतो.

शिफारस: किमान निर्देशांमध्ये आवश्यकतेनुसार जीनोमिक डीएनए इल्युशनसाठी एल्युएंट वापराकमी नाही 15 पेक्षाμl.

Lओह शुद्धता of जीनोमिक डीएनएवेगळे

कमी जीनोमिक डीएनए शुद्धतेमुळे डाउनस्ट्रीम प्रयोगांचे अयशस्वी किंवा असमाधानकारक परिणाम होऊ शकतात, जसे की: एंजाइम उघडले जाऊ शकत नाहीत, पीसीआरला स्वारस्य असलेल्या जनुकाचा तुकडा मिळू शकत नाही इ.

संभाव्य कारणे खालीलप्रमाणे आहेत:

1. हेटरोप्रोटीन प्रदूषण, आरएनए प्रदूषण.

विश्लेषण: बफर पीडब्ल्यू वापरून शुद्धीकरण स्तंभ धुतला गेला नाही;बफर PW वॉश शुद्धीकरण स्तंभ योग्य केंद्रापसारक गती वापरून धुतला गेला नाही.

शिफारस: इथेनॉल जोडण्यापूर्वी सुपरनॅटंटमध्ये पर्जन्य नाही याची खात्री करा;सूचनांनुसार शुद्धीकरण स्तंभ धुण्याची खात्री करा आणि ही पायरी वगळली जाऊ शकत नाही.

2. अशुद्धता आयन प्रदूषण.

विश्लेषण: बफर WB वॉश शुद्धीकरण स्तंभ वगळण्यात आला किंवा फक्त एकदाच धुतला गेला, परिणामी अवशिष्ट आयनिक दूषित झाले.

शिफारस: शक्य तितक्या अवशिष्ट आयन काढण्यासाठी निर्देशानुसार बफर WB 2 वेळा धुण्याची खात्री करा.

3. आरएनए एंझाइम दूषित होणे.

विश्लेषण: परदेशी RNase बफरमध्ये जोडले गेले;बफर PW वॉश ऑपरेशन चुकीचे होते, परिणामी RNase अवशेष होते, डाउनस्ट्रीम RNA प्रायोगिक ऑपरेशन्सवर परिणाम होतो, जसे की इन विट्रो ट्रान्सक्रिप्शन.

शिफारस: फोरेजीन मालिका न्यूक्लिक अॅसिडisolation किट RNase च्या अतिरिक्त जोडल्याशिवाय RNA काढू शकतात,अशा प्रकारे बुक्कल स्वॅब/एफटीए कार्ड डीएनए आयसोलेशन किटआवश्यक't RNase जोडा;बफर पीडब्लू वॉशिंग प्युरिफिकेशन कॉलमच्या सूचनांचे पालन करण्याचे सुनिश्चित करा आणि ही पायरी वगळली जाऊ शकत नाही.

4. इथेनॉल अवशेष.

विश्लेषण: बफर डब्ल्यूबीने शुद्धीकरण स्तंभ धुल्यानंतर रिक्त ट्यूब सेंट्रीफ्यूगेशन केले नाही.

शिफारस: सूचनांनुसार योग्य रिक्त ट्यूब सेंट्रीफ्यूगेशन ऑपरेशन करा.

5. इतर अशुद्धता प्रदूषण.

विश्लेषण: जतन केलेले नमुने किंवा विशेष नमुने प्रीट्रीट केलेले नाहीत.

शिफारस: निर्देशानुसार नमुन्याची पूर्व-प्रक्रिया करा.